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Medio levadura manitol-agar (LMA) (Rhizobio) 1.

Componentes Manitol

10.0 g

Agua de levadura1

100.0 ml

6 Extracto de levadura 2 0,5 g K2HPO4

0,5 g

MgSO 4 "711 2 0

0,1 g

NaCI

0,2 g

FeCl 3 "6H2 0

0,01 g

CaCl 2

0,15 g

Agar

(Difco-Bacto):3 en medio neutro

15.0 g

en medio acido

20.0 g

Solución indicadora de pH4 Ò solución de rojo Congo5

5.0 ml 10.0 ml

Agua destilada, agregar hasta 1000.0 ml

2.

Preparación Se hierve el medio hasta disolver el agar agitando de vez en cuando. Después se esteriliza en el autoclave, y se corrige su pH a

6.8 con 0.8-1.0 ml de NaOH 0.5 N

estéril, o se acidifica 1. Para preparar el agua de levadura, disolver 600 g de levadura (Fleischmann) en 5400 ml de agua y hervir durante una hora en la autoclave, sin presión. Dejar enfriar y centrifugar; a falta de una centrifuga, dejar precipitar durante 2 a 4 días en el refrigerador. Envasar volúmenes de 100 ml del sobrenadante y guardarlos sin esterilizar en el congelador. 2. Es preferible utilizar agua de levadura en aquellos lugares donde el extracto de levadura esté expuesto a la humedad, porque esta causa deterioro en su composición. 3. Para medio líquido, no se agrega el agar. 4. Azul de bromotimol 0.5% en 0,016 N NaOll, para pH 6.8 (ABT).

Purpura de bromocresol 0.5% en 0.016 N NaOI, para p11 5.5 (PBC). Verde de bromocresol 0.3% en 0,016 N NaOH, para pH 4.5 (VBC). 5. Solución acuosa de rojo Congo: 1 g por 400 ml de H20. Hasta el pH 5.5 con aproximadamente 1,7 ml de HCI 1.0 N estéril. Se acidifica después de esterilizar porque la acidez, combinada con la alta temperatura del autoclave, ocasionan la degradación del agar; por esta razón se utiliza una concentración mayor de agar para el medio acido.

3.

El uso de fungicidas en el LMA es útil para los primeros aislamientos de nódulos y para los recuentos. Si la muestra contiene muchos hongos, el fungicida no basta para inhibirlos. Deben agregarse después de la esterilizaci6n, porque se alteran en el autoclave; es aconsejable disolverlos en agua estéril y agregarlos inmediatamente después de disueltos, o esterilizarlos por filtración. Cuando el medio se ha enfriado hasta 50 ºC, se Dosis: Nistatina 0,05 g/l, Actidiona 0,1 g/l.

4. Distribución del medio en cajas Petri o en tubos El medio LMA se deja enfriar hasta 50 °C antes de distribuirlo en las cajas Petri estériles, para evitar que se produzca demasiada agua de condensación. El agar se solidifica a 44 ºC. Una caja Petri de vidrio contiene de 30 a 40 ml del medio; una caja Petri desechable contiene 25 ml.