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Macromoléculas de la levadura

A. F. Bermúdez, S.A. García, M.A Giraldo Programa académico de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad del Valle, Cali (Colombia) 24 de abril de 20! RESUMEN

"n esta #r$ctica se obtuvieron datos cualitativos re%erentes a la #resencia de macromoléculas en la levadura de #anadería, &a 'ue esta al igual 'ue todas las células eucariotas, #resentan una estructura 'uímica com#lea, en base a esto la #osibilidad de obtener #ruebas a #artir de la #reci#itacin de #roteínas, la se#aracin #or densidad del glucgeno (al igual 'ue la #rueba del almidn & el glucgeno con *ugol) & la com#aracin entre las muestras mediante el orcinol con +-, +.- & los $cidos nuclei cos obtenidos en la #r$ctica, #udieron evidenciar 'ue las macromoléculas cum#len una %uncin estructural en las células/ INTRODUCCION

"n esta #r$ctica se logr identi%icar cualitativamente los di%erentes ti#os de macromoléculas, #resentes en las células eucariotas, también se conocieron algunos métodos de identi%icacin (coloracin de com#uestos es#ecí%icos)/ *as macromoléculas tienen masas moleculares elevadas (gran gru#o de $tomos), las cuales %orman #olímeros/ Pueden ser tanto org$nicas como inorg$nica, un eem#lo de estos en %orma sintética son los #l$sticos/ "s necesario la inclusin de %ueras de van der 1aals, #uentes de idrogeno, interacciones idro%bicas & enlaces covalentes/ *as macromoléculas m$s im#ortantes & comunes en los sistemas vivos son3 #olisac$ridos com#uestos #or subunidades de acar, #roteínas %ormadas #or cadenas lineales de amino$cidos, $cidos nucleicos %ormados #or bases nucleotidicas & lí#idos %ormados #or glicerol $cidos grasos o colesterol/ "l organismo utiliado #ara llevar a cabo el #roceso es la levadura, ongos microsc#icos unicelulares con organiacin eucariota, 'ue #resentan características es#ecí%icas 'ue %acilitan ser obeto de estudio como es su %$cil & r$#ida re#roduccin, %$cil de modi%icar genéticamente, ada#tabilidad & versatilidad #ara crecer en ambientes sus#oder #ocas necesidades nutricionales/ "stas características es#ecí%icas controlados son tenidas adem$s en cuentade#ara realiar la #r$ctica &a 'ue se aco#la al obetivo #rinci#al/ Una de las #ruebas 'ue se utili #ara obtener resultados cualitativos es la reaccin de biuret, #rueba 'ue detecta la #resencia de enlaces #e#tídicos/ "l sul%ato de cobre es el reactivo utiliado, este reacciona con el enlace #e#tídico & cambia de color cuando entra en contacto/ "l color verde, es el color #ositivo #ara la #rueba/ METODOLOGÍA

*a #rimera #arte de la #r$ctica inicio con la trituracin de la levadura de #anadería con $cido tricloroacético, #osteriormente se de re#osar durante algunos minutos & se agregaron e5actamente 20g de la sus#ensin de #roteínas a la centri%uga/ *uego se obtuvieron sedimentos

con #roteínas & $cidos nucleicos 'ue %ueron agregados en un ba6o ielo, mientras el sobrenadante %ue decantado & luego #reci#itado con alcool etílico, nuevamente se agregaron 20g de esta sus#ensin & se #as a la centri%uga, #or ltimo se reali la #rueba del *ugol 'ue consisti en com#arar la coloracin entre el sedimento de glucgeno obtenido de la centri%ugacin & una solucin de almidn/ *a siguiente #arte consisti en la se#aracin de las #roteínas & los $cidos nucleicos, & esto se reali mediante la adicin de una solucin de -aCl & un ba6o de agua irviendo, luego se #asaron 20g de esta sustancia a la centri%uga, el sobrenadante con $cidos nucleicos %ue decantado a otro tubo & el #reci#itado de #roteínas %ue deado en un ba6o de ielo/ *a #reci#itacin del $cido nucleico se llev a cabo mediante alcool etílico & la utiliacin de la centri%uga, #osteriormente se reali la #rueba con el orcinol, en la cual se agregaban 7 m* de esta sustancia, 2 m* de amortiguador salino #8 9 a tres tubos de ensa&o con +-, +.- & los $cidos nucleicos obtenidos de la levadura de #anadería, & %inalmente se realiaba un ba6o de agua irviendo asta el cambio en la coloracin de estas sustancias/ *a #arte %inal del laboratorio consisti en la #rueba de Biuret, donde se tom el sedimento de #roteínas anteriormente obtenido & se le agregaron 2 m* de solucin -aCl, %inalmente se agreg m* de sul%ato c#rico & 2m* de idr5ido de sodio, al realiar esto, se observ un cambio en la coloracin de la muestra #ara las #roteínas/ RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Para la #rueba realiada sobre las #roteínas, denominada #rueba de Biuret, se io uso de #roteínas #rovenientes de células maceradas de levadura de #anadería ( Saccharomyces spp), & Cu:;4 en solucin salina de -a;8, las #roteínas se obtuvieron #or el tratamiento con $cido tricloroacético, centri%ugado de las células maceradas, & %inalmente una resus#ensin en una solucin de -aCl #ara centri%ugarse nuevamente< des#ués de esto %ue a6adido el Cu:; 4 lo 'ue dio como resultado una solucin de color violeta, *o 'ue indica el #ositivo de esta #rueba < también se observaron algunos grumos blancucos como #reci#itado, esto no ocurri #ara el tubo de ensa&o 'ue contiene solucin salina sola , a la 'ue también se le a6adi Cu:; 4/ =eniendo en cuenta lo anterior, se #uede a%irmar 'ue la reaccin ocurre debido a las #roteínas de la solucin, & no a las sales #resentes en ella, en este caso las sales nicamente desestabilian las %ueras eléctricas débiles de las #roteínas #ara 'ue ad'uieran una %orma no globular & menos soluble en agua< de a'uí se tiene también 'ue la solucin cambia de color debido a la %ormacin de un com#leo coordinado entre los electrones de los -itrgenos del enlace #e#tídico de las #roteínas & el ion Cu>2 liberado #or la disociacin del sul%ato c#rico/ "sta #rueba %unciona nicamente #ara moléculas 'ue contengan 2 o m$s enlaces #e#tídicos &a 'ue el Cu>2, re'uiere de 4 interacciones coordinadas de -itrgenos de este ti#o #ara estabiliarse/ CONCLUSIONES

Para la e5traccin de las di%erentes macromoléculas #resentes en la levadura es necesario modi%icar el medio de reaccin como la tem#eratura, rom#imiento mec$nico de moléculas, reaccin con otros reactivos, etc/ •

*a #rueba #ara determinar cuantitativamente la #resencia de $cidos nucleicos dio #ositiva, aun'ue no con un resultado com#letamente o#timo, una #robable causa del %racaso de esta #rueba se #uede deber a 'ue los reactivos se encontraban contaminados #or errores en la mani#ulacin o #erdida en la cantidad de la macromolécula en cada eta#a de la #r$ctica/

REFERENCIAS [1]Guarnizo, A y Martínez, P. 2009. Experimentos de química orgánica con enfoque en ciencias de la vida. Ediciones Elizcom. Armenia. •