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FACULTAD DE MEDICINA ALBERTO HURTADO DIRECCION DE POSTGRADO Y ESPECIALIZACION ESCUELA DE TECNOLOGIA MÉDICA SEGUNDA ESPECIALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA

Familia Enterobacteriaceae Javier Orlando Soto Pastrana Tecnólogo Medico Responsable Laboratorio de Microbiología Clínica Integrante del Comité de Control de Infecciones Intrahospitalarias Hospital Nacional Docente Madre Niño San Bartolome

Enterobacteriaceae  La Familia Enterobacteriaceae es referido a menudo como "entéricos"  Cuatro características principales: ― Todas fermentan la glucosa. ― Todos reducen los nitratos a nitritos. ― Todos excepto Plesiomonas son oxidasa negativa. ― Todos excepto Klebsiella, Shigella y Yersinia son móviles.

Identificación presuntiva de Enterobacteriaceae ¿Cuáles son los indicios iniciales de que una cepa desconocida aislada de una muestra clínica puede pertenecer Enterobacteriaceae?

UTILIZACION DE HIDRATOS DE CARBONO

ACTIVIDAD DE CITOCROMO OXIDASA

REDUCCION DE NITRATO A NITRITO

Enterobacteriaceae: Microscopia y Morfología Colonial  Bacilos o cocobacilos Gram negativos.  No forman esporas  La morfología de la colonia en AS o ACH son de poco valor, ya que tienen el mismo aspecto, salvo para Klebsiella.  Medios selectivos y diferenciales se utilizan para la evaluación inicial de colonias (ej. Agar MacConkey, HE, XLD)

0.7-0.9 µm

20 -70 µm

2-3 µm

Agar HE

Agar Mac Conkey

Agar XLD

Enterobacteriaceae: Clasificación  Debido al gran número de organismos de la familia de las Enterobacterias , las especies se agrupan en tribus, que tienen características similares.  Dentro de cada tribu, las especies son subagrupadas adicionalmente en géneros. Tribu I Escherichieae

Tribu V Klebsielleae

Tribu VI Proteeae

Escherichia

Klebsiella

Proteus

Shigella

Raoultella

Morganella

Enterobacter

Providencia

Hafnia Pantoea Serratia

Taxonomía de la Familia Enterobacteriaceae EDWARDS y EWING (1972) 11 géneros y 26 especies

FARMER y col. (1985) 22 géneros y 69 especies y 29 grupos entéricos.

CDC (2013) 31 géneros y 139 especies, biogrupos y grupos entericos.

UK Standards for Microbiology Investigations Public Health England (2015) 53 géneros y mas de 170 especies Arsenophonus Biostraticol Brenneria Buchnera Budvicia Buttiauxella Calymmatobacterium Cedecea Citrobacter Cosenzaea Cronobacter Dickeya Edwardsiella Enterobacter Erwinia Escherichia Ewingella Gibbsiella

Hafnia Providencia Klebsiella Rahnella Kluyvera Raoultella Leclercia Saccharobacter Leminorella Salmonella Levinea, Samsonia Lonsdalea Serratia Mangrovibacter Shigella Moellerella Shimwellia Morganella Sodalis Obesumbacterium Tatumella Pantoea Thorsellia Pectobacterium Trabulsiella Phaseolibacter Wigglesworthia Photorhabdus Xenorhabdus Plesiomonas Yersinia Pragia Yokenella Proteus www.gov.uk/uk-standards-formicrobiology-investigations-smi-qualityand-consistency-in-clinical-laboratories

Enterobacterias frecuentemente aisladas en muestras clínicas GENERO

ESPECIE

GENERO

ESPECIE

Escherichia

E. coli

Hafnia

H. alvei

Shigella

Grupos A , B y C

Serratia

S. marcescens

S. sonnei

Proteus

P. mirabilis

Salmonella

spp. S. typhi

Citrobacter klebsiella

Providencia

P. rettgeri

S. paratyphi A

P. stuartii

C. freundii

P. alcalifaciens

C. diversus

Morganella

M. morganii

K. pneumoniae

Yersinia

Y. enterocolitica

K. oxytoca Enterobacter

P. vulgaris

E. aerogenes E. cloacae

Y. pestis Y. pseudotuberculosis

Enterobacterias designados recientemente (1985) GENERO

ESPECIE

GENERO

ESPECIE

Budvicia

B. aquatica

Koserella

K. trabulsii

Buttiauxella

B. agrestis

Leclercia

L. adecarboxilata

Cedecea

C. davisae

L. grimontii

C. neteri

L. richardii

C. lapagei

Moellerella

M. wisconsensis

Ewingella

E. americana

Rahnella

R. aquatilis

Kluyvera

K. ascorbata

Tatumnella

T. ptyseos

K. cryocrescens

Yokenella

Y. regensburgii

Factores de virulencia y antígenos de Enterobacteriaceae

 Los factores de virulencia le da la capacidad a las Enterobacteriaceae de colonizar, adherirse, producir varias toxinas e invadir tejidos.  Algunos poseen plásmidos que pueden mediar la resistencia a los antibióticos  Muchos Enterobacteriaceae poseen antígenos que se pueden utilizar para identificar los grupos ― El antígeno O - antígeno somático, estable al calor situado en la pared celular ― El antígeno H - flagelar, antígeno termolábil ― El antígeno K - capsular, antígeno termolábil

Factores de Virulencia Enterobacteriaceae

TraT

Islas de patogenicidad (PAIs)

Estructura antigenica de Enterobacteriaceae S. typhi

O antigen side chain

(Fimbriae)

Significancia clínica Enterobacteriaceae  Entéricos son ubicuos en la naturaleza.  Se encuentran: ― El suelo, agua, plantas ― Tubo digestivos de seres humanos y animales ("coliformes fecales")

 Son causa importante de infección nosocomial  Pacientes inmunodeprimidos ― Colonizacion de cepas ambientales. ― Procedimientos invasivos.

Significancia clínica Enterobacteriaceae   



Son los BGN que se recuperan con mayor frecuencia en las muestras clínicas. Representa el 50% de todos las bacterias aisladas en el laboratorio de Microbiología Clínica. Dentro de las bacterias Gram negativas representa el 80% de todas las bacterias aisladas. Según tipo de muestra: ― Sangre: 50% ― Heces: 60-70% ― Orina: 70%

Significancia clínica Enterobacteriaceae  Basado en la producción de infecciones clínicas las Enterobacterias se dividen en 2 categorías: ― Especies comensales ― Especies patógenas primarias

 Especies comensales ― Viven en el tubo digestivo del hombre. ― Desarrollan funciones fisiológicas. ― Cuando hay factores favorecedores pueden causar infecciones oportunistas.

Principales especies de Enterobacterias de interés medico Especies comensales (oportunistas potenciales) Escherichia coli

Citrobacter freundii Citrobacter diversus

Klebsiella pneumonia Klebsiella oxytoca

Proteus mirabilis Proteus vulgaris

Serratia marcescens Pantoea agglomerans

Providencia stuartii Providencia alcalifaciens Providencia rettgeri

Hafnia alvei

Morganella morganii

Principales especies de Enterobacterias de interés medico Especies patógenas Escherichia coli

Salmonella enterica Salmonella bongori

Klebsiella rhinoscleromatis

Shigella dysenteriae Shigella flexneri Shigella sonnei Shigella boydii

Yersinia enterocolitica Yersinia pseudotuberculosis Yersinia pestis

INFECTION BY ENTEROBACTERIACEAE

GENEROS DE IMPORTANCIA MÉDICA EN LA FAMILIA ENTEROBACTERIACEAE

Citrobacter spp.

C. freundii

    

TSI K/A o A/A + gas y H2S LIA K/A + H2S Urea frecuentemente + Motilidad + Citrobacter bioquímicamente a Salmonella (aglutinan con antisueros polivalente de salmonella)  C. freundii, C. diversus (koseri) y C. amalonaticus  SIGNIFICANCIA CLINICA: ― Se pueden encontrar en las heces de humanos y animales como parte de la flora normal ― Son patógenos oportunistas causando ITU o ITR y ocasionalmente infecciones de heridas, osteomielitis, endocarditis y meningitis.

Edwardsiella tarda       

TSI K/A + gas y H2S LIA K/K + H2S Urea – Citrato – Indol + E. tarda (humanos), E.hoshinae y E. ictaluri (peces) Edwarsiella tarda se asemejan bioquímicamente a especies de Salmonella.  SIGNIFICANCIA CLINICA: ― causa enfermedad gastrointestinal en países tropicales y subtropicales. ― Produce gastroenteritis(50 a 80% de los casos), de forma leve en la mayoría de los casos o colitis grave.

Klebsiella spp.        

TSI A/A + gas LIA K/K Urea + Citrato + MR -, VP + Motilidad Tiene antígeno O y antígeno K Factores de virulencia:    

Capsula (K) Fimbrias tipo 1: adhesina FimK Sideroforos: habilidad para capturar hierro (Fe+3) Ureasa.

Klebsiella spp.  En 2001 cambios taxonómicos (Grupos filogenéticos) Grupo 1

Grupo 2

Grupo 3

Klebsiella pneumoniae subespecie pneumoniae

Klebsiella ornithinolytica

Klebsiella oxytoca

Klebsiella pneumoniae subespecie rhinoescleromatis

Klebsiella planticola

Klebsiella pneumoniae subespecie ozaenae

Klebsiella trevisanii

Klebsiella granulomatis*

Klebsiella terrígena

 Klebsiella dividida en 2 géneros: ― GRUPO 1 : especies del genero Klebsiella. ― GRUPO 2 : especies del genero Raoultella.

Significancia Clínica de Klebsiella  Forma parte de la flora normal del tracto gastrointestinal, pero es un patógeno potencial en otras áreas.  K. pneumoniae es el 2do agente etiológico de ITU comunitario. •

Causa neumonía, mayormente en pacientes inmunocomprometidos. o

•

frecuentemente ocurre daño permanente al pulmón (raro en otros tipos de neumonía bacteriana)

Es la causa principal de infecciones nosocomiales tal como sepsis y meningitis.

 Recientemente ha surgido una nueva variante de K. pneumoniae hipervirulenta (hipermucoide).

Significancia Clínica de Klebsiella  Klebsiella ozaenae se asocia con rinitis atrofica (ocena).  Klebsiella rhinoescleromatis produce la enfermedad granulomatosa rinoescleroma, una infección de la mucosa respiratoria, orofaringe, nariz y senos paranasales.  K. granulomatis es el agente etiologico del granuloma inguinal (Donovanosis).

Klebsiella pneumoniae hipervirulenta  Descrita por primera vez en el Pacífico asiático, ahora es reconocido en los países occidentales.  Estas cepas tienen la capacidad de causar graves infecciones adquiridas en la comunidad potencialmente mortales en personas jóvenes saludables. ― absceso hepático, neumonía, meningitis y endoftalmitis

 Tienen la capacidad de propagarse metastasicamente (característica inusual para BGN en pacientes no inmunocomprometidos).  Esta infección bacteriana es muy invasiva con una alta mortalidad.

Prueba de la cuerda (String test):  Se realiza a las colonias que tienen un aspecto mucoides (patognomónico).  La prueba puede ser realizado en el laboratorio, define la infección y es también útil para el diagnóstico precoz.  Los genes magA y rmpA establecen el diagnóstico de infección debido a Klebsiella pneumoniae hipervirulenta

Prueba de la cuerda

Resultado: > de 5 mm es definida como positiva.

Brote por Klebsiella pneumoniae Lisina Descarboxilasa Negativa productora de ß-Lactamasa de Espectro Extendido en una Unidad de Cuidados Intensivo Neonatal Javier Soto, Socorro Torres, Juan Carlos Riveros, Nazario Silva, Rosa Sacsaquispe, Víctor Suarez HONADOMANI San Bartolome , Instituto Nacional de Salud , Lima, Perú, 2007

XI CONGRESO PERUANO DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS Y TROPICALES 2009

Muestras Clínicas Paciente

H.C.

Cod. Lab. Edad Servicio Fecha

Cultivo

Bacteria

Biotipo API

BLEE

Ayala Lorenzo RN.

616819

07D-2075

4 días

UCI

01/09/07

Sangre

K. pneumoniae

1215773

si

Ayala Lorenzo RN.

616819

07D-2086

6 días

UCI

03/09/07

Sangre

K. pneumoniae

1215773

si

Requena Saucedo RN. 618226

07D-2126

4 días

UCI

07/09/07

Sangre

K. pneumoniae

1215773

si

Jiménez Valverde RN.

618197

07D-2133

3 días

UCI

10/09/07

Sangre

K. pneumoniae

1215773

si

Alamo Sanchez RN.

617751

07D-2135

3 días

UCI

10/09/07

Sangre

K. pneumoniae

1215773

si

Requena Saucedo RN. 618226

07D-2157

11 días

UCI

11/09/07

Sangre

K. pneumoniae

1215773

si

Alamo Sanchez RN.

617751

07D-2156

6 días

UCI

11/09/07

Sangre

K. pneumoniae

1215773

si

Requena Saucedo RN. 618226

07C-1597

10 días

UCI

14/09/07

Cateter

K. pneumoniae

1215773

si

Estudio de Portadores (3/7) Paciente Lopez Sanches RN Alamo Sanchez RN. Llano Meneses RN.

H.C.

Cod. Lab. Edad Servicio Fecha

Bacteria

Biotipo API

BLEE

618350

P-01

5 días

UCI

11/09/07 K. pneumoniae

1215773

si

617751

P-05

6 días

UCI

11/09/07 K. pneumoniae

1215773

si

612990

P-07

10 dias

UCI

11/09/07 K. pneumoniae

1215773

si

Estudio Ambiental (1/14) Muestra Leche Materna (Alamo Sanches RN)

Cod. Lab. Servicio M-12

UCI

Fecha

Bacteria

11/09/07 K. pneumoniae

Biotipo API

BLEE

1215773

si

Agar Mac Conkey con Cefotaxima 2µg/ml

CARACTERÍSTICAS DE FALLECIDOS CON CULTIVO POSITIVO A KLEBSIELLA PNEUMONIAE UCIN HONADOMANI SB. SETIEMBRE 2007 PACIENTES

1 (AL)

2 (RS)

3 (JV)

4 (AS)

Fecha de nacimiento Catéter Umbilical Ventilación Mecánica Peso al nacer Edad Gestacional Edad Materna CPN T' hosp materna (horas) Tipo de parto Infecc Materna RPM Fecha de Dx de Infección Fecha de Hemocultivo (KP) SDR, EMH Depresion Severa ASFIXIA Fallecimiento

27/08/07 SI SI 840 34 Inadec PV 10 días 03/09/07 03/09/07 SI No SI

03/09/07 SI SI 1320 32 27 1 1 Cesárea no no 04/09/07 08/09/07 NO SI SI

05/09/07 SI SI 785 26 24 1 120 Cesárea no no 07/09/07 08/09/07 SI SI SI

05/09/07 SI SI 860 28 31 0 168 P.V no 7 días 07/09/07 10/09/07 SI SI SI

N° Biotipo 3043

N° Biotipo 1215773

Klebsiella pneumoniae Productora de BLEE

Para comparar genéticamente las cepas se realizó la prueba molecular ERIC-PCR, la cual amplifica regiones repetitivas de enterobacterias mediante PCR. MP SB-A SB-B SB-C SB-D SB-E SB-F SB-G SB-H SB-I CS

MP: Marcador de peso molecular 1 Kb ladder Fermentas; SB-A: cepa K. pneumoniae 2126.: SB-B: cepa K. pneumoniae 2133; SB-C: cepa E. coli 196-07 (cepario del INS); SB-D: cepa K. pneumoniae 2135;S B-E: cepa K. pneumoniae 206-07 (cepario del INS); SB-F: cepa K. pneumoniae 2086;S B-G: cepa K. pneumoniae 1; SB-H: cepa K. pneumoniae 12; SB-I: cepa K. pneumoniae 223-07 (cepario del INS); CS: Control de sistema.

INFORME DEL INS: Los resultados moleculares muestra que las cepas de K. pneumoniae aisladas e identificadas por laboratorio de Microbiología del Hospital San Bartolomé están genéticamente relacionadas.

CAZ

AZT

AMC CTX FOX

UCI - NEONATAL

IMP

Rev Soc Peru Med Interna 2013; vol 26 (4)

Enterobacter spp.  TSI, LIA, y urea variables ― dependiendo de la especie.

 Citrato +  Las colonias de Enterobacter pueden ser ligeramente mucoide.  Enterobacter y las especies Klebsiella se puede diferenciar (Enterobacter es motilidad + y ornitina +).  Enterobacter agglomerans genero Pantoea  SIGNIFICANCIA CLINICA ― ― ― ―

Forma parte de la flora normal del tracto gastrointestinal E. cloacae y E. aerogenes frecuente en muestras clínicas. Produce infecciones nosocomiales (ITU, sepsis, neumonía) Tambien bacteremia en pacientes quemados.

Enterobacter sakazakii  Antes de 1980; "Enterobacter cloacae con pigmento amarillo".  En 1980, una nueva especie E. sakazakii ( en honor al microbiólogo japonés, Riichi Sakazaki).  En 2007, un nuevo genero, "Cronobacter".  C. sakasakii es un peligro microbiológico en la cadena de la alimentación infantil.

Serratia spp.  TSI A/A o K/A; +/- gas 

     

no fermentan lactosa

LIA frecuentemente K/K Citrato + Positivo Motilidad + Urea +/Gelatinasa + S. marcescens produce pigmento rojo

― La mayoria + en cepas ambientales ― Algunas veces + en cepas nosocomiales  Significancia clinica: Es un microorganismo saprofito − Se ha aislado en sepsis, ITR y ITU nosocomial. − Es resistente a muchos antimicrobianos.

Proteus, Providencia y Morganella  Proteus, Providencia, and Morganella  Todos son móviles ― Proteus H2S presenta fenómeno de swarming

 Fenilalanina desaminasa +

― Lisina desaminasa y Triptofano desaminasa.

 Lisina desaminasa +: (LIA R/A)  La mayoria Urea + ― Urea muy fuerte para Proteus ― P. alcalifaciens es siempre urea ―

 TSI es variable  Indole + ― solamente P. mirabilis is ―

R/A

Proteus, Providencia y Morganella  Factores de virulencia ― Ureasa: genes UreA y UreB, el amonio producido puede dañar las células epiteliales del tracto urinario. ― Flagelos peritricos: FlaA y FlaAB.

 SIGNIFICANCIA CLINICA ― Todos son parte de la flora normal del tracto gastrointestinal (excepto Providencia). ― Causan infecciones del tracto urinario (ITU), como tambien neumonia, sepsis e infecciones de heridas.

Plesiomonas shigelloides       

TSI K/A gas - y H2S LIA K/K (fuerte) Indol + Citrato Oxidasa Motilidad + positiva Oxidasa + P. shigelloides es un nuevo miembro de la familia Enterobacteriaceae (2005).  Denominada shigelloides debido a su parecido con Shigella sonnei.  BGN, anaerobio facultativo, móvil, utiliza la glucosa e inositol.

Plesiomonas shigelloides  Algunas cepas de Plesiomonas comparten antígenos con Shigella sonnei, y ocurren reacciones cruzadas con antisueros de Shigella.  Significancia Clínica:    

Crece de 0 - 5% de sal (Habitante natural de ríos, lagos, agua de mar). La infección más común en humanos es la gastroenteritis (fuente de infección el agua, peces y vegetales frescos contaminados con aguas residuales). La han aislado a partir de muestras clínicas humanas: heces, sangre, orina, LCR, heridas y el tracto respiratorio. También se ha aislado de agua dulce, peces de agua dulce y mariscos y de muchos tipos de animales.

Especies de Yersinia  Tres especies son importantes patógenos en el hombre. ― Yersinia pestis – causa la plaga o peste ― Yersinis enterocolitica – enteropatogénica ― Yersinia pseudotuberculosis – enteropatogénica

 Identification ― Y. pestis no es movil. ― Y. enterocolitica y Y. pseudotuberculosis ambos son no moviles a 37°C, pero moviles a 22°C. ― Y. pestis es identificado por las siguientes características: o o o

No móvil Coloración bipolar Pequeñas colonias en medios de cultivos de rutina (lento crecimiento, mejor crecimiento a bajas temperaturas 25-30° C).

Yersinia pestis. o o o o o o

TSI K/A no gas LIA K/A Urea – Estudios de patogenicidad en ratones Prueba de inmunofluorescencia directa (anticuerpos) Pruebas moleculares (DNA probe test)

 Factores de virulencia: ― ― ― ― ― ― ―

Endotoxina: es responsible de muchos de los sintomas. La fracción 1: proteína de la cápsula antifagocitica.. Antígeno V: controla la expresión de genes de virulencia. Pla - una proteasa anticomplemento (degrada C3b, C5a) PSA - una adhesina fimbrial Sideroforos (yersiniobactina) SST3, Sistema de Secrecion Tipo 3 o

YopB y YopD – evacion de la fagocitosis

Yersinia pestis.  SIGNIFICANCIA CLINICA 

En el hombre, la peste se presenta en dos formas; bubónica y neumónica. 



La peste bubónica (transmitida por las pulgas de un roedor infectado), la tasa de mortalidad es alta sin tratamiento. La peste neumónica puede ser transmitida directamente a los demás a través de aerosoles. La inhalación directa de aerosoles que contienen el microorganismo produce una forma de la enfermedad que progresa mucho más rápidamente y la tasa de mortalidad es cercana al 100%.

 El tratamiento de la plaga 

La estreptomicina y la tetraciclina son efectivos

factores de virulencia de Yersinia enterocolitica y Yersinia pseudotuberculosis  Factores de virulencia Yersinia enterocolitica ― Enterotoxina: similar a E. coli ST (diarrea acuosa) ― Adhesinas: fimbriales y no fimbriales o Invasina (Inv), la mas importante. ― Proteínas antifagociticas (YopE, YopH y YopT): incluyen proteínas secretadas y de la membrana externa. o o

o

Algunos se inyecta directamente en el huésped a través de un mecanismo de secreción de tipo III (SST3). YopP y YopJ, interfiere con la capacidad de los PMNs para responder a señales que los conducen a las bacterias invasoras (antiflamatorias). YopP y YopJ, alteran el citoesqueleto de actina y provocan la muerte de los PMN (apoptosis).

Factores de virulencia de Y. enterocolitica y Y. pseudotuberculosis  Factores de virulencia Yersinia enterocolitica (cont.) ― Antígeno V - una proteína secretada que controla la expresión de muchos de los genes de virulencia además de que parece tener otra función desconocida que es esencial para la virulencia. ― Sideroforos (yersiniabactina) captación de hierro ― Yad A - una proteína de membrana externa que interfiere con la unión del complemento (C3b) y la bacteria, evitando así la formación de un complejo de ataque de membrana. ― Endotoxina (LPS). Productor de fiebre.

 Factores de virulencia de Y. pseudotuberculosis ― Los mismos factores de virulencia como Y. enterocolitica, excepto la enterotoxina.

Significancia Clínica de Y. enterocolitica y Y. pseudotuberculosis  Ambos son adquiridas por ingestión de alimentos o agua contaminadas.  Y. enterocolitica causa enfermedad en humanos  Y. pseudotuberculosis causa enfermedad en animales.  Ambos causan una enfermedad que implica la fiebre y el dolor abdominal.  Y. enterocolitica también causa una diarrea acuosa.

Yersinia enterocolitica  Causa la enfermedad yersiniosis  Infección a través de: ― alimentos ― agua contaminadas (transfusiones).

 Dosis infectante: 104 – 105.  En el tracto digestivo produce: ― Gastroenteritis aguda ― Enterocolitis ― Linfaedenitis mesenterica ― Ileitis terminal.

 La sepsis es poco frecuente.

Primeros Aislamientos de Yersinia enterocolitica en el Perú Guevara J M, Chumpitaz J, Vergara J. Anaya R, Terreros A, y Requena A. Diagnostico,1980, 6 (6): 273-276 Fecha de aislamiento

Medio de Aislamiento

+

15/05/78

SB- Resembrado en DC

O:3

M

+

17/05/78

SB- Resembrado en H

O:3

17 a

F

+

25/05/78

Sel- Resembrado en SS

O:3

HMC

52 a

F

+

27/05/78

SS

O:3

5

HMC

6m

F

+

03/06/78

Sel- Resembrado en Te

O:9

6

HMC

59 a

F

+

06/06/78

SS

O:9

7

HNiño

8m

F

+

12/12/78

SS

O:3

Caso Nº

Hospital

Edad

Sexo Diarrea

1

HSB

1a

F

2

HSB

2m

3

HMC

4

Serogrupo

Nº casos: 100 muestras de heces; HSB: Hospital San Bartolome, HMC: Hospital Militar Central y Hniño: Hospital del Niño. Los medios de cultivo empleados: medio de transporte Cary Blair, Agar Salmonella-Shigella (SS), Agar Desoxicolato-Citrato (DC), Agar Hektoen Enteric (H), Agar Tergitol (Te), caldo Selenito (Sel) y Solución Salina Bufferada. (SB).

Medios de Aislamiento Primario  Las colonias de Y. enterocolitica en agar Mac Conkey y agar SS son transparentes.  En agar Hektoen son de color salmón (fermentan sacarosa) y en agar XLD son de color amarillas (fermentan xilosa).  Crecen mas lentamente a 37ºC.  Las colonias son muy pequeñas, y pueden pasar desapercibidas. Revista Argentina de Microbiología (2010) 42: 79

Agar Mac Conkey

Agar SS

Agar XLD

Medios de Aislamiento Primario  Medio selectivo y diferencial el Agar CIN (contiene Cefsulodine, Irgasan, Novobiocina y manitol).  La concentración de cefsulodine 4µg/ml (C3G)  Las colonias son manitol positivo (“ojo de buey”).  Puede ser usado para la detección de Aeromonas spp. , Yersinia spp. y P. shigelloides. (costo-beneficio) Clin. Microbiol. Rev. 2010, 23(1): 1 35-73

cefsulodine

Medios de Enriquecimientos  Enriquecimiento en frio (4ºC): ― Sol. salina buferada (pH 7,2) ― Agua peptonada. ― Desventaja: mantener a 4 °C durante un máximo de 21 días.

   

Caldo Selenito Caldo Rappaport Caldo bilis-oxalato-sorbosa Desventaja: ― Posibilidad de aislar cepas de Yersinias no patógenas.

Identificación  Identificación de Yersinia enterocolitica y Yersinia pseudotuberculosis :    

   

Ambos son móviles a 22-25°C, pero no móviles a 37°C Ambos exhiben coloración bipolar. Ambos crecen mejor a bajas temperaturas y producen pequeñas colonas a 37°C. TSI A/A para Y. enterocolitica (fermentación de sacarosa, no de lactosa). K/A para Y. pseudotuberculosis LIA K/A para ambos Urea + para ambos ODC + para Y. enterocolitica solamente

Identificación  Bioquímicamente Y. enterocolitica se caracteriza porque fermenta carbohidratos sin producción de gas, son móviles a 28ºC pero no a 37ºC. Escherichia coli

Y. enterocolitica P H Y S

28ºC

37ºC API 20E S: 93% (a 28ºC)

TSI

LIA

TSI

LIA

Caso Clínico Paciente masculino de 7 meses (HC: 742535) llega el día 27/09/12 al servicio de emergencia del Hospital San Bartolome con dos días de enfermedad, presentando fiebre y diarrea con heces semilíquida, con moco y sangre. El 27/09/12 se solicita reacción inflamatoria presentando leucocitos mas de 100/campo y hematíes de 30 a 40/campo. Se deriva al servicio de la URO para evaluación y tratamiento, y se le solicita también cultivo de heces. El 29/09/12 se aísla colonias sospechosas de Y. enterocolitica en el cultivo de heces. El 01/10/12 se confirma como Y. enterocolitica bioquímicamente mediante sistema automatizado VITEK y serológicamente.

Caso Clínico

Caso Clínico Agar XLD

Agar Hektoen

Agar CIN

Agar MacConkey

Agar SS

Agar SMAC

CONCLUSIONES:  Los métodos de aislamientos ineficientes son la razón de la tasa de la baja de prevalencia de Y. enterocolitica.  El limite de detección para Y. enterocolitica patogénica es 103 a 106 o mas UFC/gr. de heces.  Las colonias de Y. enterocolitica no patogénicas y patogénicas tienen la misma apariencia.  Los métodos de aislamiento favorecen la recuperación de el bioserotipo O:3

Colonias de Y. enterocolitica en agar CIN

Serología de Y. enterocolitica  La serotipificación parece ser un buen marcador de virulencia.  La Y. enterocolitica serotipo O:8 es conocido como altamente patogénico.  Los serotipos O:3 y O:9 son los mas frecuentes causando infección y son menos destructivos  El serotipo O:9 presenta reacciones cruzadas con Brucella sp. y Vibrio cholerae.

Contaminación porcina  Diversos alimentos procedentes de animales pueden ser portadores de Y. enterocolitica.  Y. enterocolitica puede multiplicarse en refrigeración (210°C) y en condiciones microaerofilia (5-10% de O2)  Control de la bacteria en todos los procesos: ― en la granja ― en el transporte al matadero ― durante el sacrificio

carne de cerdo

XI CONGRESO PERUANO DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS Y TROPICALES “JOSE NEYRA RAMIREZ” 19, 20 y21 de Noviembre de 2009 - LIMA SHERATON & CONVENTION CENTER

MÉTODO DE ENRIQUECIMIENTO RÁPIDO PARA EL AISLAMIENTO DE YERSINIA ENTEROCOLITICA EN MUESTRAS DE INTESTINO DE CERDOS Autores: Salinas Ivan, Gonzales Arturo, Soto Javier. OBJETIVOS: Evaluar un método de enriquecimiento rápido para Yersinia enterocolitica y determinar su frecuencia en cerdos de un camal en la ciudad de Lima. MATERIAL Y METODOS: Se recolectaron 44 hisopados de intestino de cerdos. Estos fueron transportados en Cary- Blair al Laboratorio del Hospital San Bartolome y fueron sembrados inicialmente en agar Mac Conkey, posteriormente enriquecidos en medio alcalino de KOH al 0,5% en solución salina al 0,85% (2 minutos), sembrándose finalmente en otra placa de agar Mac Conkey. Las placas fueron incubadas a 37º C por 24 horas y mantenidas a temperatura ambiente por 24 horas adicionales. Los aislamientos fueron identificados por medios convencionales y confirmadas por API 20E. RESULTADOS: Se aisló Yersinia entercolítica en un 20.4% (9/44) de los hisopados procesados por el método de enriquecimiento y hubo ausencia total de flora acompañante en las placas de aislamiento. En la siembra directa, no se aisló ninguna cepa de Yersinia enterocolítica.

Fig. 1. Método de enriquecimiento para Yersinia enterocolitica; KOH al 0.5% en suero fisiológico y el medio de transporte de Cary-Blair.

Fig. 2. Colonias de Yersinia enterocolitica en Agar Mac Conkey las 48 horas a temperatura ambiente. El numero de colonias en el medio de cultivo es escaso.

CONCLUSIONES: La escasa recuperación de Yersinia enterocolítica en los productos alimenticios y en materias primas puede tener diversas causas. Entre ellas se encuentra el nivel de flora acompañante en el producto, la cantidad de yersinias patógenas y no patógenas presentes en la muestra, la pérdida de factores de virulencia durante las etapas de enriquecimiento y aislamiento; y por último, el método de recuperación. Dada la alta frecuencia encontrada en muestras intestinales de cerdos, y que estas son utilizadas para el consumo humano, recomendamos su búsqueda en muestras de pacientes con EDA. Sugerimos evaluar el uso de este método de enriquecimiento en muestras clínicas humanas por ser rápido, económico y de fácil uso. Correspondencia: Gonzales Arturo, Escuela de Tecnología Médica. Facultad de Medicina de San Fernando -UNMSM- Local Central Av. Grau 755 Lima 01 Tlf: 999977435, e-mail: [email protected].