Dra.: Ximena Robalino

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA: LABORATORIO CLÍNICO E HISTOPATOLÓGICO ASIGNAT

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA: LABORATORIO CLÍNICO E HISTOPATOLÓGICO

ASIGNATURA: HEMATOLOGÍA I

DOCENTE: DRA.: XIMENA ROBALINO

TERCER SEMESTRE “A”

ESTUDIANTE: JERÉZ BENALCÁZAR BRYAN GUSTAVO.

INFORME DE LABORATORIO N° 05 TEMA: RECUENTO DE ERITROCITOS

FECHA DE ENTREGA: RIOBAMBA, 14 DE JULIO, 2019

PERIODO: ABRIL-AGOSTO 2019

PERÍODO ACADÉMICO ASIGNATURA

INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO ABRIL – AGOSTO 2019 HEMATOLOGÍA SEMESTRE: I TERCERO Mgs. XIMENA ROBALINO FLORES

PARALELO: “A”

NOMBRE DEL DOCENTE FECHA Riobamba, 07 de junio del 2019 NÚMERO DE 5 HORA: 10:00 -13:00 DURACIÓN: 3 horas PRÁCTICA LUGAR DE LA LABORATORIO CLÍNICO DE DOCENCIA PRÁCTICA TÍTULO DE LA SERIE ROJA UNIDAD TEMA DE LA RECUENTO DE ERITROCITOS PRÁCTICA RESULTADO DE APRENDIZAJE. Aplica conocimientos teórico-prácticos mediante procedimientos y técnicas manuales y/o automatizadas de análisis de laboratorio en el área de Hematología en muestras biológicas, para formar profesionales capacitados. OBJETIVO GENERAL 

Desarrollar una técnica correcta con respecto a la prueba de conteo de eritrocitos en función al aprendizaje, desempeño y diagnóstico implicado en dicha prueba.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS    

Obtener una muestra de Sangre por Punción Venosa con tubo al vacío Realizar un conteo de eritrocitos exitoso de forma manual en tubo. Realizar un conteo de eritrocitos exitoso de forma manual en pipeta de Thoma. Interpretar y correlacionar los resultados obtenidos.

FUNDAMENTO TEÓRICO: ERITROCITOS RECUENTO DE ERITROCITOS Los procedimientos generales de recuento de eritrocitos incluyen la aspiración de una cantidad muy exacta de sangre en una pipeta escrupulosamente limpia. A continuación se diluye hasta una determinada señale la misma pipeta con un líquido que es anticoagulante e isotónico respecto a los eritrocitos. Después de efectuar la adecuada mezcla, la solución resultante se coloca en una cámara de recuento muy limpia (hemocitómetro) y se cubre con un cubreobjetos estandarizado ópticamente plano y limpio. La cantidad de eritrocitos se cuenta sobre la platina de un microscopio de luz. HEMOCITÓMETRO O CÁMARA CUENTA GLÓBULOS Es un instrumento de vidrio compuesto por dos cámaras de recuento separadas por un

surco horizontal y limitadas a cada lado por un canal vertical. El mejor modo de mantenerlos limpios es con agua, secarlos con un paño blando y guardarlos en alcohol absoluto, cuando se va a utilizar se secan cuidadosamente con un paño blando. PIPETAS DILUTORAS Son de vidrio tubulares y su calibración es muy cuidadosa. Si se precisa pueden calibrarse por métodos gravimétricos o colorimétricos. La sangre aspirada hasta la señal 0.5 y diluida hasta la señal 101 hace una dilución de 0.5 partes en 100(o sea 1:200) en la zona de la ampolla de la pipeta, porque el contenido libre de las células de la parte capilar no participa en el proceso de dilución. LIQUIDO DE DILUCIÓN Existen diversos tipos de líquidos de dilución utilizados en el laboratorio. Los más comunes son los líquidos de Gower y de Hayem. TÉCNICA DE RECUENTO DE ERITROCITOS 1.

Se mantiene horizontalmente la pipeta y se introduce una muestra de sangre en la misma exactamente hasta la señal 0,5. Un exceso de sangre se puede reducir hasta que descienda a la señal 0.5 tocando ligeramente el extremo de la pipeta con el dedo. Es preciso eliminar cualquier resto de sangre que esté por fuera de la pipeta.

2.

La pipeta se coloca inclinada (45°) y se gira ligeramente a medida que se llena hasta cerca de la señal 101. A continuación se coloca verticalmente y se termina de llenar con el líquido de dilución hasta la señal 101.

3.

Se quita con cuidado el tubo de aspiración de goma y la pipeta se sujete entre el dedo pulgar y medio colocado en ambos extremos, sometiéndola a una agitación horizontal e inclinada durante 2 a 3 minutos. Más cómodo resulta obturar los extremos con unos tapones de goma y colocarla en un agitador; a tal fin sirve la perla de vidrio situada en la ampolla de la pipeta, que facilita una mezcla fácil, y rápida de la solución con la muestra de sangre.

4.

Después de la agitación, se desprecian las 4 a 8 primeras gotas de cada pipeta para eliminar el líquido del capilar que no contiene hematíes. A continuación se carga el hemocitómetro.

5.

Se coloca el cubreobjetos exactamente encima de las cámaras de recuento. La pipeta, parcialmente vacía, se sujeta como si fuese un lápiz. Mediante el dedo índice se controla el flujo de líquido colocándolo en el extremo próximo a la ampolla; el extremo de la pipeta se coloca en el borde que une el cubreobjetos y la cámara. Se disminuye la presión del dedo índice y el líquido pasa entre el cubreobjetos y el hemocitómetro por atracción capilar hasta que se llena la cámara. No debe haber burbujas y los surcos adyacentes no deben contener líquido.

6.

Se coloca el hemocitómetro en la platina del microscopio y se deja 3 minutos para que las células se distribuyan. Utilizando un objetivo de 10 x se localiza el cuadrado grande central y se comprueba que las células estén uniformemente distribuidas. Después se pasa al objetivo de 40 x y con la luz reducida se cuentan las células en 5 de

los 25 cuadrados pequeños situados en el gran cuadrado central; es decir, los 4 cuadrados pequeños externos y uno central. Como cada cuadrado pequeño está limitado por dobles líneas (en el rayado modificado de Neubauer) y cada uno contiene 16 cuadrados más pequeños, se cuenta un total de 80 cuadrados más pequeños. Las células que están situadas tocando las líneas que limitan los bordes superior e izquierdo de cada cuadrado más pequeño se incluyen en el recuento y se excluyen las de los límites inferior y derecho. Se comienza a contar por el cuadrado pequeño superior izquierdo externo y a continuación el superior derecho externo, el inferior derecho externo, el inferior izquierdo externo y finalmente el central. En los 16 cuadrados más pequeños que contienen los cuadrados menores, se inicia el recuento de izquierda a derecha contando los cuatro primeros cuadrados pequeños, y luego de derecha a izquierda los cuatro cuadrados de lalínea inferior, y así sucesivamente. Se anota por separado el número de los hematíes de cada grupo de 16 cuadrados y se suman los resultados. Cálculo y trascripción de los resultados. El recuento eritrocitario total sólo se calcula exactamente cuándo se tienen en cuenta las dimensiones del espacio hemocitómetro cubreobjetos y las diluciones de la pipeta. Es decir, que se calcula mejor el número de hematíes por milímetro cúbico de sangre cuando se tienen en cuenta el área contada, la profundidad de la cámara y la dilución, según la fórmula siguiente: ERITROCITOS: Número de eritrocitos contados x 400 x 200 x 10 80 Área total de la cámara: 400 Dilución: 200 Profundidad o altura de la cámara: 10 Área contada: 80 ERITROCITOS x mm cúbico: Número de eritrocitos contados x 10.000 REPORTE: Eritrocitos en millones x mm cúbico de sangre total Si el paciente está muy anémico o si se han contado menos de 400 células debe disminuirse la dilución hasta 1:100 llenando la pipeta con sangre hasta la señal 1,0 en lugar de hasta la señal 0,5. Si el paciente está intensamente policitémico o se han contado más de 600 células, debe aumentarse la dilución de la sangre hasta 1:500 o 1:333 llenando la pipeta con sangre hasta la señal 0,2 o 0,3 respectivamente. MATERIALES Y MÉTODOS Equipos Materiales  Cámara de Neubauer  Pipeta de Thoma  Microscopio  Gradilla de tubos wintrobe Agitador automático  Equipo para toma de muestras de de pipetas sangre  Piano contador de  Papel absorbente células  Absorbedor de goma  Tubos de ensayo pequeños  Pipetas automáticas de 1000 - 100 ul,

  

Reactivos Alcohol antiséptico Líquido de dilución Hayem Gradilla

MUESTRA  Sangre total obtenida con anticoagulante EDTA PROCEDIMIENTO / TÉCNICA: PROCEDIMIENTO DEL RECUENTO DE ERITROCIDOS.

DILUCIÓN EN PIPETA DE THOMA. 1. Preparamos nuestro material apropiadamente, además de nuestra áreade trabajo en donde vamos a llevar a cabo nuestra práctica. 2. Se mantiene horizontalmente la pipeta y se introduce una muestra de sangre en la misma exactamente hasta la señal 0,5. 3. La pipeta se coloca inclinada (45°) y se gira ligeramente a medida que se llena hasta cerca de la señal 101. 4. A continuación se coloca verticalmente y se termina de llenar con el líquido de dilución hasta la señal 101. 5. Posteriormente quitaremos con cuidado el tubo de aspiración de goma y sujetaremos la pipeta entre el dedo pulgar y medio colocado en ambos extremos 6. La someteremos a una agitación horizontal e inclinada durante 2 a 3 minutos, teniendo en cuenta que se puede utilizar el agitador de tubos automático. 7. Después de la agitación, se desprecian las 4 a 8 primeras gotas de la respectiva pipeta para eliminar el líquido del capilar que no contiene hematíes. 8. A continuación se preparará la cámara de Neubauer cuidadosamente colocando un cubre objetos en el centro de los dos vectores de recuento. 9. Se colocará cuidadosamente con el uso de una pipeta automática en las superficies externas del cubre objetos, ingresando por capilaridad el líquido hacia nuestros vectores de observación. 10. Como uno de los pasos finales colocaremos nuestra cámara bajo el microscopio para su posterior observación, aumentando los objetivos gradualmente hasta 40x en donde realizaremos el conteo respectivo.

Descripción.- Observación de la pipeta de Thoma y de los cuadrantes para la realización del conteo eritrocitario.

DILUCIÓN EN TUBO DE ENSAYO a. Preparamos nuestro material apropiadamente, además de nuestra área de trabajo

en donde vamos a llevar a cabo nuestra práctica. b. Posteriormente una vez se encuentre rotulado el tubo de ensayo que utilizaremos para la práctica respectiva, colocaremos una cantidad de 1900 microlitros de reactivo de Hayem c. Posteriormente agregaremos 10 microlitros de sangre con anticoagulante (EDTA) d. Realizaremos golpes con cierto grado de potencia para homogeneizar adecuadamente dando como resultado una dilución 1: 200 e. Posteriormente con ayuda de nuestra pipeta automática tomaremos una pequeña cantidad de sustancia que al igual en el proceso anterior ingresara en los cuadrantes de observación de nuestra cámara de Neubauer por capilaridad. f. Realizaremos nuestro respectivo contero de eritrocitos, para posteriormente aplicar las fórmulas aprendidas. g. Aplicaremos la fórmula: ERITROCITOS: Número de eritrocitos contados x 400 x 200 x 10 80 h. La fórmula nos ayudará en ambos procedimientos para obtener el recuento respectivo, valor que deberemos comparar con los valores de referencia respectivos para brindar un reporte apropiado. RESULTADO (Gráficos, cálculos, etc.) IMÁGENES

DESCRIPCIÓN

IMAGEN 1. Observación del procedimiento de extracción sanguínea concerniente a la presente práctica

IMAGEN 2. Podemos observar cómo se obtuvo la muestra de extracción sanguínea en con anticoagulante EDTA

IMAGEN 3. Podemos observar un instrumento denominado piano que nos servirá para llevar a cabo el conteo respectivo eritrocitario.

IMAGEN 4. Podemos observar el desarrollo de la prueba en base al uso de la pipeta de Thoma.

IMAGEN 5. Observaremos nuestro instrumento que nos ayuda a homogeneizar correctamente la muestra mediante el uso de vibraciones consecutivas

IMAGEN 6. Observaremos el montaje de nuestra sustancias en la cámara de Neubauer para el desarrollo respectivo de la lectura y conteo

CÁLCULOS.

Conteo de los campos A – B –C –D - E CAMPOS A B C D E TOTAL

CONTEO 108 99 113 95 98 506

APLICACIÓN DE LA FÓRMULA

ERITROCITOS: Número de eritrocitos contados x 400 x 200 x 10 = 80

506 ERITROCITOS x 400 x 200 x 10 = 80

= 5´060.000 Eritrocitos x mm3

NOTA: El valor obtenido coincide con los resultados normales dentro de los valores de referencia conocidos para mujeres.

OBSERVACIONES 

Se observó que los resultados pueden variar de acuerdo a la técnica realizada, en ciertos casos dando un valor irreal y muy elevado de lo que sería el valor verídico del paciente, esto en caso de pipeta de Thoma por su mal uso.



Se observó que el recuento de eritrocitos puede realizarse por dos formas, de las cuales debemos señalar deben dar un valor aproximado la una de la otra.



Se observó que el uso de reactivos que se encuentren en regla resulta imprescindible y que el mismo no debe ser contaminado accidentalmente con restos de sangre del paciente.

CONCLUSIONES Una vez culminada la práctica de laboratorio se ha llegado a las siguientes conclusiones: 

Se ha obtenido una muestra de Sangre por Punción Venosa con tubo al vacío con anticoagulante EDTA, cuyo resultado es satisfactorio en relación a la comodidad del paciente.



Se ha realizado el conteo de eritrocitos exitoso de forma manual en tubo cuyo resultado oscila entre los 5´060.000 Eritrocitos x mm3, siendo un resultado aceptable en relación al género femenino de nuestra paciente encontrándose dentro de los valores normales.



Se ha realizado el conteo de eritrocitos exitoso de forma manual en pipeta de Thoma, cuyo resultado obtenido oscila entre los 5´000.000 Eritrocitos x mm 3, siendo un resultado aceptable en relación al género femenino de nuestra paciente encontrándose dentro de los valores normales.



Al momento de interpretar y correlacionar los resultados obtenidos, hemos podido concluir la eficacia de la prueba realizada y el estado normal de nuestra paciente en relación al reporte emitido.

RECOMENDACIONES Una vez culminada la práctica de laboratorio se ha llegado a las siguientes recomendaciones: 

Se recomienda reforzar la práctica con respecto al uso de la pipeta de Thoma con respecto a la dilución debido a que puede representar un cierto grado de dificultad en novatos.



Se recomienda el uso de líquido de Hayem en pequeñas cantidades separadas del reactivo principal debido a que pueden existir riesgos como la contaminación accidental del reactivo por la sangre del paciente.



Se recomienda el utilizar una pipeta automática para el trasvaso de las respectivas cantidades de sustancias a lo largo del transcurso de nuestra práctica.

REPORTE

Nombre: Lizbeth Satán Médico: Dr.: Camilo Benalcázar. Fecha: Riobamba, 12 de julio, 2019

Código: 008 Edad: 20 años Muestra: Sangre.

RESULTADO. EXAMEN Recuento de Eritrocitos

RESULTADO

VALOR DE REFERENCIA

5´060.000 Eritrocitos x mm3

MUJERES: 4.2 – 5 millones Eritrocitos x mm3 HOMBRES: 4.7 - 5.5 millones Eritrocitos x mm3

FIRM

A DEL ANALI

STA RESPONSABLE. C.I. 1804435442

PREGUNTAS: 1.- Ponga la composición del líquido de Hayem:

IDENTIFICACIÓN DEL PRODUCTO Identificación de la sustancia o del preparado Denominación:   Líquido de Hayem   Uso de la sustancia o preparado: Para usos de laboratorio, análisis, investigación y química fina.       COMPOSICIÓN/INFORMACIÓN DE INGREDIENTES  

 



Mercurio(II) Cloruro 0,1 % - 0,5 %



CAS [7487-94-7]      Fórmula: HgCl2     M.=271,50     



Número CE (EINECS): 231-299-8    



Número de índice CE: 080-010-00-X R: 28-34-48/24/25-50/53

2.- Ponga cuáles son las dimensiones de la cámara de Neubauer En la retícula central, la cámara de Neubauer tiene un cuadrado primario que contiene nueve cuadrados secundarios, cada uno de ellos dividido a su vez en 16 cuadrados terciarios. El cuadrado secundario central contiene no 16, sino 25 cuadrados, cada uno de ellos dividido a su vez en 16 cuadrados cuaternarios. En los bordes de este cuadrado central se cuentan los hematíes, utilizando sólo los cuadrados de los bordes del terciario central y uno de los centrales. En los secundarios de los bordes superiores e inferiores de la cámara se hace el recuento leucocitario. 3.- Elaborar una tabla con los valores de referencia del número de eritrocitos por edad, género y altura geográfica VALORES DE REFERENCIA DE RECUENTO ERITROCITARIO. 4.2 – 5 millones Eritrocitos x mm3 4.7 - 5.5 millones Eritrocitos x mm3

MUJERES: HOMBRES:

EDAD Recién Nacido 3 meses 1 año 3 a 5 años

RECUENTO DE ERITROCITOS 4 – 5 millones / ml 3,2 a 4,8 millones / ml 3,6 a 5 millones / ml 4 a 5,3 millones / ml

5 a 15 años Hombre adulto Mujer adulta

4,2 a 5,2 millones / ml 4,5 a 5 millones / ml 4,2 a 5,2 millones / ml

NOTA: Consideraremos que las variaciones de altitud geográfica serán: ± 0,5 millones / ml 4.- Qué dilución se debe utilizar en el caso de pacientes con anemia y poliglobulia? PACIENTE ANÉMICO. Si el paciente está muy anémico o si se han contado menos de 400 células debe disminuirse la dilución hasta 1:100 llenando la pipeta con sangre hasta la señal 1,0en lugar de hasta la señal 0,5. PACIENTE CON POLIGLOBULIA. Si el paciente está intensamente policitémico o se han contado más de 600 células, debe aumentarse la dilución de la sangre hasta 1:500 o 1:333 llenando la pipeta con sangre hasta la señal 0,2 o 0,3 respectivamente. BIBLIOGRAFÍA 

GARCÍA ESPINOZA, Benjamín. Hematología II, Citología, Fisiología y Patología de hematíes y leucocitos. Paraninfo



VIVES CORRONS, Joan Lluís. Manual de Técnicas en Laboratorio de Hematología. Tercera edición. Masson. 2006



HUERTA J. Oncología para el pediatra de Atención Primaria (II): formas de presentación de las diferentes neoplasias infantiles. Form Act Pediatr Aten Prim. 2014;7:67-74.



Carrillo R, Morales N, Ramírez FJ. Pseudotrombocitopenia: reporte de un caso y revisión de la bibliografía. Med Int Mex. 2009;25:163-8.



Díaz C, Bastida P. Interpretación del hemograma pediátrico. An Pediatría Contin. 2004;2:291-6.