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• gustavo uriel martinez key

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    DISCUSIÓN  Para comenzar el aislamiento del DNA plasmídico se resuspendió el plásmido puc19  en  la  solución  I,  compuesta  por  Tris,  EDTA  y glucosa. El Tris tiene una función como  regulador  de  pH  =  7.4,  seguido  del  EDTA  que  prohíbe  la  degradación  del  DNA  y  la  glucosa  que  tiene  como  función  generar  un gradiente de concentración. La reacción  se llevó a cabo en hielo para reducir la actividad enzimática.  Enseguida  se  adicionó  la  solución  II  contiene  SDS,  que  se  encarga  de  disolver  la  membrana bacteriana y el NaOH, que hidroliza el RNA.  La  siguiente  solución  agregada  fue  la  III,  la  cual  contenía  acetato  de  potasio  que  neutraliza  las  cargas  negativas  de  los  grupos  fosfato  del  DNA,  provocando  precipitación.  La  solución  IV  contiene  isopropanol,  el  cual  provoca  que la constante dieléctrica del  agua para no solvatar el DNA plasmídico.  Por último, la solución V que contenía nuevamente Tris-EDTA.  Con  el  fin  de  comprobar  el  aislamiento  del  DNA  plasmídico,  se  realizó  una  electroforesis  en  gel  de  agarosa,  ya  que  separa  fragmentos  de ácidos nucléicos por  su tamaño y carga.        CONCLUSIONES  En la práctica se pudo comprobar la presencia de DNA plasmídico dentro de la  célula bacteriana, DNA que solo se a descubierto que cuenten las bacterias y que  este tiene un gran uso en su información genética, ya que se a observado que el  ADN plasmídico participa en la transferencia de genes de una bacteria a otra por un  método llamado de conjugación, en donde una célula donadora genera una copia del  plásmido que es transferido a una célula receptora dándole así la información  genética que la otra bacteria tiene. De esta manera los plásmidos donados pueden  darle a una bacteria la información genética de resistencia a antibióticos, de  producción de sustancias tóxicas o la codificación de enzimas útiles para la  degradación de sustancias químicas. Por este motivo su estudio es de suma  importancia ya que a partir de estos plásmidos se pueden usar de una manera  beneficiosa para el ser humano en donde modificando su material genético del 

plásmido la célula bacteriana nos pueda brindar de alguna sustancia química que el  cuerpo no es capaz de producir por sí solo o posiblemente modificar su estructura  para que las bacterias dejan de tener la información de resistencia a antibióticos.     La utilización de bromuro de etidio es fundamental para poder colorear y observar el recorrido de DNA a través del soporte de agarosa, se pone de manifiesto con luz UV, aprovechando las propiedades de irradiación que genera con el DNA. El corrimiento de DNA plasmídico que obtuvimos fue el penúltimo, se observa una mayor cantidad de RNA, después de DNA con estructura súper enrollada, seguida de la estructura lineal y por último la relajada. La estructura súper enrollada viaja más rápido a través del soporte de agarosa ya que se mantiene intacta su estructura. La estructura lineal de DNA se debe a que una hebra del ADN se rompió haciendo que su recorrido sea más lento que el anterior mencionado y por último la estructura relajada corresponde a que el DNA se quedó muy dañado y se fragmenta ocasionando que su recorrido sea más lento que las otras dos estructuras.

CONCLUSIONES Es posible aislar DNA plasmídico y ponerlo de manifiesto con bromuro de etidio y luz UV en una placa de agarosa con azul de bromofenol, mediante el empleo de la electroforesis. Se puede observar la calidad del aislamiento de DNA, debido a la observación de las zonas de recorrido, este dependerá de la estructura del mismo, que puede ser súper enrollada, lineal y relajada. Obtuvimos mayor recorrido de DNA conservando su estructura súper enrollada, por lo que se concluye que el asilamiento fue de buena calidad.

  BIBLIOGRAFÍA  -Andersson, D. I. (2016). Evolution of Antibiotic Resistance. The Princeton guide to  evolution. J. B. Losos, Princeton University Press.  -Davis LG, Dibner MK, Battey JF (1986) Basic Methods in Molecular Biology.  Elsevier.  -Baltrus, D. A. (2013). "Exploring the costs of horizontal gene transfer." Trends in  Ecology & Evolution 28(8): 489-495.