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• Keren Vega Abella

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DIVERSIDAD CELULAR I CÉLULAS PROCARIOTAS TINCIÓN Y SU OBSERVACIÓN

Resumen Las bacterias y células procariotas pueden ser observadas en el microscopio, pero antes de poder observarlas deben pasar por varios procesos como lo son la preparación de la muestra, la extensión, el secado y la fijación. Si no se hace este procedimiento correctamente es posible que la muestra no se pueda observar correctamente, por eso es importante cumplir con el protocolo para la observación de los ejemplares; después de esto se pudo proceder con la observación en el microscopio utilizando los métodos aprendidos en el laboratorio anterior a este; también se aplicaron diferentes técnicas de tinción. Palabras claves: Preparación, células, bacterias, tinción simple, tinción de Gram.

Abstract The bacteria and prokaryotic cells can be observed under the microscope, but before he could observe must go through several processes such as sample preparation, extension, drying and fixing. If this procedure is not done correctly it is possible that the sample can’t be observed correctly, it is important to comply with the protocol for the observation of specimens, then this could proceed with the observation in the microscope using the methods learned in previous to this lab, different staining techniques were also applied. Key words: Preparation, cells, bacteria, simple stain, Gram stain.

Introducción Como sabemos antony leewuenhoeck era un holandés aficionado a la ciencia, antony en realidad era un comerciante, no tenía educación universitaria pero esto irrelevante para su época pues lo importante era que leewuenhoeck tenía una curiosidad insaciable y una mente abierta, lo que lo llevo a hacer varios de los grandes descubrimientos en el área de la biología como lo son el descubrimientos de las bacterias y la construcción de sencillo microscopios. Actualmente gracias a la avanzada tecnología se usan microscopio con mucho más aumento que los de aquella época; además se ha avanzado mucho en la observación de las muestras pues se realizan lo que se llama técnica de tinción dependiendo de lo que queramos ver a través del microscopio. También en el transcurso de los años se amplió el conocimiento sobre las bacterias, fueron clasificándolas dependiendo a su forma o el color que adquieren durante su tinción, incluso por los organelos que se encontraban en su interior.

Metodología y preparación: Antes de empezar cualquier actividad dentro del laboratorio se tomaron las medidas necesarias para la ejecución de las observaciones de las células

procariotas, se explicó que clases de muestras se iban a tomar osea el frotis bucal y el frotis vaginal y de que formas se van a preparar cada una de ellas, pues debían observarse de tanto en tinción simple como en diferencial, estos procesos recién mencionados son relativamente para lo mismo pero el procedimiento de cada uno es diferente, pues la tinción simple es realizada solo con azul de metileno, lavado con agua suavemente y secado, mientras que en la tinción diferencial o tinción de GRAM se necesitan 4 de los cuales 3 duran 60 segundos sobre la muestra y luego son lavados y otro que dura solo 10 segundos y luego es retirado con agua.

Resultados •Frotis bucal con tinción simple: cuando el frotis se observó con el objetivo de 10x se apreció el aumento de la imagen, y la coloración azul debido a la tinción hecha con anterioridad; y fue muy difícil la identificación de algún tipo de bacteria o célula. Al pasar a la observación con el objetivo de 40x la imagen se vio mucho más detallada con la presencia de diferentes tipos de bacterias, tales como: Bacilos, Cocos (en gran proporción), Diplococos y Espirilos. Y por último con el objetivo de 100x se observó la presencia de células rodeadas de los

diferentes organismos mencionados anteriormente.

•Frotis bucal con tinción diferencial: cuando el frotis fue observado con el objetivo de 10x se pudo ver células teñidas de color fucsia y azul, en su gran mayoría con formas cuadradas y otras algo redondas. Cuando se pasó al objetivo de 40x se pudo apreciar la presencia de algunas células y grandes cantidades de bacterias tales como: Cocos (con colores tales como fucsia y azul oscuro), Diplococos, Vibriones, Bacilos, un Espirilo y un Estafilococo. Y por último con el objetivo de 100x se pueden observar las mismas estructuras pero con un tamaño mucho mayor.

•Frotis de yogurt con tinción simple: cuando se observó el frotis de yogurt con el objetivo 10x, lo primero que se vio fue la coloración azul causada por el tipo de tinción y unos que otros Cocos. Cuando se pasó a la observación con el objetivo de 40x se pudo hacer una observación más clara y concisa de algunas estructuras tales como: Cocos y Bacilos propios de la sustancia. Y por último con el objetivo de 100x solo se observó detalladamente una muestra de estafilococo.

•Frotis vaginal con tinción simple: durante la observación del frotis vaginal con el objetivo 10x, no se pudo observar mucho detalle a cerca de la muestra, sin embargo, es visible en una gran proporción las bacterias cocos, las cuales estaban esparcidas a lo largo y ancho del frotis vaginal, y también se notó que por efectos de la tinción ésta tomó una coloración azul. Con el objetivo de 40x la imagen se logra ver más detallada, por lo cual, es posible apreciar restos de tejido vaginal y muchas bacterias tales como: Cocos, Bacilos, Estreptococos y pocos Diplobacilos. Y por último con el objetivo de 100x debido a que la imagen es más detallada, se pueden observar la mayoría de las bacterias, tales como: Estreptococos, muchos Cocos, cantidades de Bacilos y Diplobacilos, y en pequeñas cantidades bacterias Estafilococos.

Frotis vaginal con tinción diferencial: durante la observación del frotis vaginal con el objetivo 10x al aplicar el colorante de Gram, se es posible observar muchos Bacilos y una gran cantidad de Cocos y Diplococos. Con el objetivo de 40x se logran ver cantidades de Bacilos y muy pocas bacterias Cocos. Las bacterias son GRAM positivas en su mayoría, puesto que al agregársele la tintura, obtuvieron una coloración azul oscuro, lo cual permitió darle esa caracterización. Y por último con el objetivo de 100x se logró ver gran proporción de Bacilos y en equilibrio bacterias GRAM negativas y GRAM positivas, al igual que cantidades de Diplobacilos, y unas contadas

bacterias

Cocos.

peptidoglicano confiere una gran resistencia a estas bacterias y es la responsable de retener el tinte durante la tinción de Gram. Mientras que la Gram negativa presentan dos membranas lipídicas entre las que se localiza una fina pared celular de peptidoglicano, mientras que las bacterias Grampositivas presentan sólo una membrana lipídica y la pared de peptidoglicano es mucho más gruesa. Al ser la pared fina, no retiene el colorante durante la tinción de Gram.

Conclusión

Discusión Durante este laboratorio se pudo observar cuando una bacteria es Gram positiva y Gram negativa. En el caso de la Gram positiva se tiñe de azul o violeta debido a la característica Química que está íntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular por lo que refleja un tipo natural de organización bacteriana. La envoltura celular de las bacterias Gram-positivas comprende la membrana citoplasmática y una pared celular compuesta por una gruesa capa de peptidoglucano, que rodea a la anterior. La pared celular se une a la membrana citoplasmática mediante moléculas de ácido lipoteicoico. La capa de

Durante este laboratorio pudimos observas las diferencias de las bacterias tanto en su forma ya sean alargadas o redonda. Y también las formas de tinción en las diferentes muestras tomadas del frotis bucal y el frotis vaginal.

Agradecimientos * Primero que todo debemos a agradecerle a Dios por darnos la sabiduría e inteligencia para permitirnos hacer el siguiente trabajo. * A nuestros padres por brindarlos el apoyo tanto económico como espiritual para la realización de ello. * A nuestra profesora TANIA DE LA HOZ. Por compartir sus conocimientos con cada uno de nosotros y por querer enseñarnos cada día más.

*A la universidad del magdalena por permitirnos instruirnos en las ciencias de la salud.

Preguntas complementarias • ¿Por qué deben usarse coloraciones para observar los microorganismos? Porque de no ser así las estructuras no podrían tener una accesibilidad visual buena; y estoy es porque muchas de esas estructuras son muy claras y no hay contraste en la misma. Por ello, hay la necesidad de colorearlas para así poder observar su morfología, estructuras y ciertos comportamientos que toman, que permiten estudiar ciertos factores patológicos.

• ¿Para qué se usa la coloración de azul de metileno? Ese tipo de colorante se usa para observar la morfología de las estructuras presentes en el porta objetos, mediante el microscopio. Se caracteriza porque es utilizado en las tinciones simples y tiñe todas las estructuras de un solo color (azul).

•Según Gram ¿Cómo se dividen las bacterias? Según Gram las bacterias se dividen en dos grandes grupos: Gram Positivas: son uno de los principales grupos de bacterias, y se caracterizan porque se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram: de aquí el nombre de "Gram-positivas" o también "Gram positivas".

Gram Negativas: son uno de los principales grupos de bacterias y se caracterizan porque no se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram, y lo hacen de un color rosado tenue: de ahí el nombre de "Gram-negativas" o también "gramnegativos".

• ¿Por qué se debe enfriar el asa antes de usarla? Porque si ésta es utilizada con alta temperatura la muestra se puede ver afectada, es decir, todos aquellos microorganismos o estructuras vivas existentes en la muestra se pueden carbonizar y de esa manera se desvirtúa el análisis.

• ¿Cómo se clasifican las bacterias según su forma? Descríbelas.

Los científicos también usan la forma de la bacteria para su clasificación, hay tres tipos, redondas, cocos, del griego kokkos baya, barras, bacilos del latín palillos o barras y espiral. Bacilos: La palabra bacilo (plural bacilos) se usa para describir cualquier bacteria con forma de barra o vara, y pueden encontrarse en muchos grupos taxonómicos diferentes tipos de bacterias. Sin embargo el nombre Bacillus, se refiere a un género específico de bacteria.

Cocos y diplococos: un coco solo y los diplococos son dos cocos en forma redonda unidos.

Estreptococos: son cocos en una formación lineal.

Estafilococos: son cocos en forma de racimo de uva.

Bacterias Vibriones: son Gram negativas con forma de bacilos curvados. Bioquímicamente se caracterizan por dar positivo en las pruebas de la catalasa y de la oxidasa; y es una bacteria anaerobia facultativa, y su metabolismo es fermentativo.

Bacterias Espirilos: poseen una marcada forma de espiral. Éstas son bacterias Gram negativas y terribles para la salud. Un claro ejemplo es la Treponema, que causa la enfermedad de transmisión sexual de la sífilis.

• ¿Por qué se dice que la coloración con azul metileno es una coloración simple y directa y con Gram es una coloración diferencial? Porque con el colorante Azul de Metileno solo se puede observar la morfología, los tipos de estructuras presentes en la muestra y se evidencia una solo color (azul). En cambio el colorante GRAM permite diferenciar cuáles son las bacterias Gram positivas (teñidas de azul oscuro) y las Gram negativas (teñidas de fucsia). • ¿Cuál es la diferencia entre capsulas y capa mucosa en la bacteria? La diferencia que existe es que la cápsula bacteriana es una capa con borde definido formada por una serie de polímeros orgánicos que en las bacterias se deposita en el exterior de su pared celular y la capa mucosa o glicocálix refiere al material polimérico extracelular producido por algunas bacterias u otras células, tales como las epiteliales. La capa mucilaginosa usualmente compuesta de glicoproteínas y proteoglicanos que está presente sobre la superficie exterior de los peces también se considera un glicocálix. • ¿Cuál es la composición química de la capsula bacteria? Generalmente está constituido por glicoproteínas y un gran número de polisacáridos diferentes, incluyendo polialcoholes y amino azúcares. • ¿Qué tipo de antibióticos se conocen para las bacterias GRAM positivas y GRAM negativa? Las tetraciclinas y cloranfenicol: son antibióticos de amplio espectro, eficaces frente a bacterias gram-positivas y gram-negativas. Amoxishot premix: está formulado sobre la base de una penicilina semisintética – amoxilina con amplia actividad frente a bacterias gram positivas y gram negativas. resistente a los jugos gástricos, tiene una excelente absorción intestinal,

alcanzando rápidamente altos niveles en plasma y difundiéndose por todo el organismo, con una buena persistencia. Floxaid 10%: su exclusivo mecanismo de acción antibacteriana se produce mediante la inhibición de la enzima ADN girasa, imprescindible para la multiplicación bacteriana, y que al ser un mecanismo exclusivo de este grupo químico, actúa allí, donde ya se ha producido resistencia a los antibióticos. Sulfamidas: son agentes antimicrobianos sintéticos, bacteriostáticos, con un espectro amplio que abarca la mayoría de los "gram-positivos" y muchos ‘gramnegativos'. Cefalosporinas: las cefalosporinas tienen, como las penicilinas, un anillo betalactámico que interfiere con la síntesis de la pared celular bacteriana y son también antibióticos bactericidas. son más eficaces que la penicilina frente a los bacilos gram-negativos, e igual de eficaces frente a los cocos gram-positivos.