• Author / Uploaded
• Rodrigo Diaz Sumen

Citation preview

DIACNOSTICO INMUNOLOGICO: REACCIONES SEROLOGICAS DE AGLUTACION Tradicionalmente el diagnóstico definitivo pasa por la identificación, el aislamiento en cultivo puro del patógeno, de este modo la morfología, actividad bioquímica y patrón de sensibilidad a los antimicrobianos podrán ser examinados y evaluados. Sin embargo algunos microorganismos no se pueden cultivar in vitro como Treponema pallidum, Mycobacterium Leprae y en algunos otras enfermedades infecciosas un diagnóstico serológico es mucho más económico y rápido, pero no definitivo. Otra forma de diagnóstico es por la detección de un producto específico del agente infeccioso que no puede formarse sin la presencia del agente en el material clínico obtenido del paciente. El método serológico tradicional para el diagnóstico de enfermedades infecciosas demuestra (mediante un aumento significativo del título) una respuesta de anticuerpos específicos humorales contra el microorganismos en cuestión. Ejemplos de reacciones serológicas de aglutinación son las pruebas para anticuerpos contra Brucella y Salmonella que son parte de un panel de pruebas para aglutinaciones febriles. Aglutinación bacteriana o reacciones febriles. Las reacciones febriles son un conjunto de pruebas que sirven como su nombre lo indica para diagnosticar enfermedades que cursan con fiebre, como Fiebre tifoidea (Salmonella), Brucelosis (fiebre ondulante, fiebre de Malta) y Rickettsiosis (Fiebre Q, fiebre manchada de las montañas rocallosas). Está basada en la investigación de la presencia de aglutininas (anticuerpos) contra la fiebre tifoidea, La brucelosis y el tifo, que indican que el individuo padece enfermedad o que ha estado en contacto con el germen (antígeno) sin llegar a contraerla. Estas reacciones febriles comprenden la Reacción de Widal para la fiebre tifoidea y paratifoidea, La Reacción de Huddlesson para la brucelosis y La Reacción de Weil - Félix para el tifo. a.- Reacción de Widal La reacción de Widal utiliza como antígeno una sepa de Salmonella Typhi en fase O (o sea sin flagelos) y otra en fase H (flagelo). Además se tienen otros antígenos Salmonella paratyphi A yB. Los falsos positivos de la reacción de Widal también han sido descritos en procesos no infecciosos, como enfermedades autoinmunes (artritis reumatoide- lupus eritematoso sistémico) y hepatopatías crónicas, lo cual contribuye aun más a su baja especificidad En la reacción de Widal, también hay que considerar los falsos negativos como toda prueba de laboratorio, entre sus causas tenemos 1. Antibioticoterapia temprana, la cual, retrasa la aparición de anticuerpos (descrito principalmente con cloranfenicol) 2. Utilización de corticosteroides 3. Medición temprana de anticuerpos (primera semana) 4. Inmunodeficiencias adquiridas y congénitas. 5. Portadores crónicos de Salmonella typhi. 6. Relacionadas a estandarización de la prueba

El diagnòstico definitivo de Fiebre tifoidea se establece mediante el aislamiento de Salmonella en cultivo (hemocultivo, mielocultivo) de un paciente con cuadro clínico compatible b.- Reacción de Huddlesson Se lleva a cabo con antígeno de Brucella abortus otras especies para detectar anticuerpos contra fiebre malta. Existen varios metodos serologicos para el diagnóstico de Brucelosis como el Rosa de Bengala, 2-mercapto-etanol. El diagnóstico de certeza se establece aislando al microorganismo a partir de cultivos de sangre, médula ósea u otros tejidos. c.- Reacción de WEIL-Félix La reacción de Weil-Félix utiliza Proteus OX-19 como antígeno para detectar anticuerpos contra Rickettsia prowaseki, debido a que posee los mismos antígenos y por la facilidad de su manejo en el laboratorio. Material. 

Suero de paciente



Antigeno (tifico O y H, paratífico A y B, brucela, proteus OX -19.)



Láminas de vidrio para aglutinaciones



Pipetas serológicas de 0,2 ml o pipetas automáticas de 20 ul



Palitos mondadientes

Procedimiento. a.- Técnica cualitativa: 1. Colocar una gota de suero problema en cada uno de los espacios marcados en la lámina 2. Agregar una gota de cada uno de los antígenos sobre la gota de suero problema 3. Mezclar uniformemente con un mondadientes cada gota, rotar la lámina por 3 minutos y observa los resultados. Lectura. Positivo: Aparición de grumos de tamaño variables que tienden a agruparse en la superficie de la gota. Negativo: La mezcla permanece homogénea. b.- Técnica cuantitativa.

1. Con una pipeta de 0,2 ml. O pipetas automáticas de 20, 10 y 5 ul, depositar 0,08(80ul), 0,04(40 ul), 0,02(20 ul), 0,01(10 ul), 0,005(5 ul) del suero problema en la lámina. 2. Añadir una gota de antígeno que dio aglutinación en la prueba cualitativa a cada cuota del suero. 3. Con el mondadientes mezclar y rotar la lámina durante 3 minutos. Lectura: Realizar la lectura teniendo en cuenta la presenc ia de grumos de acuerdo a la siguiente equivalencia: Suero problema:

Título:

0.08 ml

1/20

0,04 ml

1/40

0,02 ml

1/80

0,01 ml

1/160

0,005 ml

1/320

Títulos mayores de 1/80 tienen significación diagnóstica