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LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA / GRUPO 07 CUESTIONARIO FINAL PRÁCTICA 4 Evaluación del potencial antioxidante de xenobióticos NÚMERO DE EQUIPO: ​6​ INTEGRANTES: ✔ Cruz Rodríguez Abraham Eduardo ✔ Estrada Sánchez Daniela Joselyn ✔ Ramírez Fabían Lester Leonel ✔ Rangel Rodríguez Diego ✔ Romero Flores Andrea

Se realizó la evaluación de los siguientes antioxidantes Prueba

Absorbancia C+ 0.318

Inhibición de XO

0.290 0.330 0.220

Captura de ​O2•ˉ

0.234 0.221

Antioxidante

Myo - inositol

Curcumina

Azuleno

Absorbancia (inh Xo) 0.288 0.220 0.303 0.123 0.154 0.178 0.100 0.078 0.140

Absorbancia (captura de ​O2•ˉ) 0.09 0.05 0.123 0.330 0.276 0.247 0.122 0.132 0.143

Antioxidante

Myo - inositol

Curcumina

Azuleno

% Inhibición de XO

% Captura de O2•¯

9.434 24.138 8.182 61.321 46.897 46.061 68.553 73.103 57.576

59.091 78.632 44.344 -50.000 -17.949 -11.765 44.545 43.590 35.294

Promedio % Inhibición de XO

Promedio % Captura de O2•¯

13.918

60.689

51.426

-26.571

66.411

41.143

1) Calcule el % de inhibición de XO y % de captura de O​2​•¯ para cada uno de los antioxidantes

2) De acuerdo a los resultados de la Tabla 2, ¿Cuál es el mecanismo de acción antioxidante que se propone para cada uno de los compuestos utilizados? Justifique su respuesta. A) Myo-inositol, la actividad antioxidante de esta molécula radica en la captura del radical anión superóxido, su estructura tiene la capacidad suficiente para capturar este radical libre, frente a su pobre actividad inhibitoria de la enzima xantina oxidasa. B) Curcumina, su actividad antioxidante radica en prevenir que la xantina oxidasa realice su actividad catalítica, favoreciendo la disminución de la producción tanto de xantina como de ácido úrico, y a su vez la disminución de peróxido de hidrógeno y radical anión superóxido. C) Azuleno, su actividad antioxidante radica en ambos procesos, sin embargo esta molécula tiene mejor capacidad antioxidante frente a la inhibición de la actividad enzimática de xantina oxidasa. 3) Explique la razón por la que un compuesto presenta un porcentaje de actividad antioxidante de cero

o cercano a cero. Puede ser que el compuesto tenga una estructura que permita una alta reactividad frente a radicales libres pero muestra una nula o muy moderada actividad antioxidante, que se vería reflejada únicamente como actividad antirradicalaria.

4) Explique la importancia de realizar las pruebas de Xan-XO y Xan-XO-NAT de manera conjunta cuando se trata de establecer si el mecanismo de acción antioxidante es la inhibición de la XO y/o la captura de O 2 •¯. Cuando el mecanismo de acción es la inhibición de la XO, es debido a que se inhibe la Xantina oxidasa, por lo que ya no cataliza la reacción de la Xantina con el H​2​O​2 , disminuyendo la cantidad de ácido úrico en las lecturas, producto de esta reacción. En cambio, cuando es la captura de O 2 •¯, aquí se toma como parámetro a medir la especie reactiva de oxígeno producida por la xantina oxidasa. Aquí al combinarse la especie reactiva con el NAT, da una reacción colorida, una sustancia es un buen antioxidante mediante la captura de O 2 •¯ cuando disminuye la presencia de esa especie reactiva en el tubo, produciendo una

reacción menos colorida. Cuando comparamos las mediciones de ambos métodos y resulta que la medición la absorbancia de la inh de XO es mayor que la del % de captura de O 2 •¯, esto quiere decir que el mecanismo de acción antioxidante es mediante la captura de O 2 •¯. En cambio, cuando la absorbancia de la inh de la XO es menor que la del O 2 •¯, significa que el mecanismo de acción antioxidante es mediante la inhibición de la XO. 5) En caso de que el compuesto a evaluar presente baja solubilidad en agua describa brevemente y de manera general, ¿Cuáles serían las acciones que tomaría para poder realizar las pruebas empleadas en el laboratorio? Se podría investigar la naturaleza de la sustancia (polar, no polar, etc) y su estructura, con base en el resultado escoger un disolvente adecuado para esa sustancia, y que pueda utilizarse en el laboratorio, tomando en cuenta el precio del disolvente y si va a generar algún cambio en la molécula como cambiar su estado de ionización. 6) Discuta brevemente sus resultados y escriba sus conclusiones al respecto. El compuesto Myo-inositol presenta una mejor capacidad antioxidante al inhibir o capturar radicales libres a comparación de los otros dos antioxidantes, mientras que el que recibió un mayor porcentaje para inhibir la actividad catalítica de la xantina oxidasa fue el azuleno, que a su vez presenta una capacidad del 41% para capturar los radicales anión superoxidos. En cuanto a la curcumina, presenta un porcentaje de inhibición de la actividad enzimática mayor al 50%, disminuyendo la concentración de los productos generados y los radicales libres formados como subproductos sin embargo, la curcumina no presentó captura de anión superóxido y es por eso que el porcentaje sale negativo, su mecanismo de acción no es de captura de esa especie reactiva de oxígeno. Dentro del campo médico, los antioxidantes son de gran importancia para la salud ya que evitan que las especies reactivas (principalmente de oxígeno) que produce nuestro organismo o que entran a nuestro cuerpo por el medio ambiente hagan algún daño a nuestro cuerpo al deteriorar nuestras biomoléculas. Se ha visto que los pacientes que presentaban enfermedades cerebrovasculares tienen disminuidos los niveles de antioxidantes. Aunque la investigación de antioxidantes ya no sea tan popular como antes, no se debe menospreciar, ya que su potencial para el mejoramiento de la salud aún es bastante grande.