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• Alejandro Jair Ruiz Madrigal

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INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS GENETICA MICROBIANA LABORATORIO

NOMBRES: Alvarado Hernández Gladis Susana Ruiz Madrigal Alejandro Jair MATERIA: Genética microbiana SECCION: 1 EQUIPO: 1 PROFESOR: Calvo Villarreal Ilse Alicia Espinoza Lara

FECHA DE ENTREGA : 03/02/15 PRACTICA TRANSFERENCIA DE MATERIAL GENETICO POR CONJUGACION EN Escherichia coli

INTRODUCCION La conjugación se basa en el intercambio unidireccional de información genética desde una bacteria donante a otra receptora mediante un contacto real. Los plásmidos son los elementos genéticos que con mayor frecuencia se transmiten de esta forma. La capacidad de conjugación depende de la presencia en la bacteria de plásmidos conjugativos que contienen los genes necesarios para tal proceso. Un ejemplo muy conocido de plásmido conjugativos es el plásmido F de E. coli que codifica las proteínas necesarias para la conjugación, incluyendo el pili sexual. Éste, es una estructura especializada esencial para el contacto entre la bacteria donadora y la receptora. Las células que lo poseen se llaman F+, masculinas o donantes y las que carecen de él se denominan F-, femeninas o receptoras. El resultado de la conjugación es una bacteria con las características de las dos cepas progenitoras.

Generalmente, los plásmidos conjugativos solamente causan la transferencia de su propio material genético pero en ocasiones el plásmido puede integrarse al cromosoma bacteriano y en el momento de conjugar se transferirá no solo a sí mismo, sino también a los genes cromosómicos que se encuentran tras él. Teóricamente todo el cromosoma podría ser transferido lo que requeriría más de dos horas, pero la unión entre las bacterias por medio del pili persiste menos tiempo. Las cepas bacterianas con el plásmido F tienen gran capacidad de recombinación por lo que se denominan cepas hfr por su sigla en inglés (high frecuency of recombination). Este es un mecanismo muy efectivo para la transferencia de genes de resistencia antibiótica.

OBJETIVOS  

Cuantificar la transferencia de material genético por medio de conjugación en bacterias Gram(-) Establecer las diferencias entre las transconjugantes que se obtienen a partir de las células donadoras Hfr y F+ y con receptoras Rec + y Rec -

Resultados Calculo de título bacteriano (Dia 1)

Se muestran resultados de cálculos de título bacteriano a partir de una muestra inicial de 40 unidades klett(UK) donde 1 UK=4X10^6 células/ml.(Kistler and Lin) Estas se calcularon a partir de las diluciones 10^-3, 10^-4, 10^-5 en caldo L Y vaciado en placa. Titulo bacteriano de Escherichia coli. (cepas: CSH62,JC4046, RC712 y KL323.) CEPA

Dil 10^-3

Dil 10^-4

Dil 10^-5

CSH621

incontable

incontable

incontable

CSH622

incontable

incontable

incontable

incontable

CSH623

s/d

s/d

s/d

s/d

CSH624

incontable

incontable

incontable

JC40463

s/d

s/d

s/d

s/d

s/d

JC40464

incontable

incontable

incontable

incontable

incontable

JC40465

incontable

incontable

JC40466

incontable

incontable

incontable

RC7121

incontable

incontable

incontable

incontable

336 incontable

3.3x10^8

RC7122

incontable

incontable

incontable

incontable

300

3x10^8

RC7125

incontable

incontable

RC7126

incontable

incontable

incontable

KL3233

incontable

incontable

incontable

349

272

33 3.11x10^7

KL3234

incontable

incontable

incontable

94

163

2 1.23x10^7

230 his+ de la misma manera en que se encuentran localizados estos genes en la cepa de Escherichia coli CSH62 en su mapa genético a partir del origen de replicación. Los resultados de la cruza F´ se distinguen por la frecuencia en la que se obtuvieron las transconjugantes his+ y la relativa baja pero similar frecuencia de los otros marcadores, esto describe el comportamiento típico de una cepa F´. Prueba de la gota Los resultados obtenidos en esta prueba nos indicaron la presencia del pili F en las transconjugantes lo cual es indicativo de la cruza F´x F- y fue asi como se pudo observar en la mayoría de los equipos, se esperaba observar halos de inhibición de lisis con turbidez homogénea en la cepa donadora JC4046 y en las transconjugantes con esta cepa lo cual queda demostrado por los resultados del equipo 3 y 5.

Conclusiones Se logró determinar una frecuencia de transferencia de material genético entre cepas del genero Escherichia con cepas donadoras tipo Hfr y F´.

Se estableció una diferencia en los patrones de transferencia de Hfr y F´, obteniendo una transferencia de marcadores en gradiente en alta frecuencia y una transferencia especifica del plásmido/marcadores cromosómicos de baja frecuencia y aleatorio respectivamente entre las donadoras. En las cepas receptoras no se pudo determinar una diferencia debido a que no creció ninguna transconjugante en los ensayos de los equipos 3 y 4, sin embargo se esparaba que la cruza Hfr x F- disminuyera su frecuencia de transferencia de marcadoras pero aun conservara la transferencia de marcadores en gradiente y en la cruza F´ x F - no se esperaba ver una diferencia significativa debido a que la expresión del marcador de la donadora está dado por el plásmido.

Bibliografía

1. http://cvb.ehu.es/open_course_ware/castellano/salud/tecnicasmol/tema2pdf.pdf 2. http://www.sci.sdsu.edu/~smaloy/MicrobialGenetics/topics/plasmids/conjugation.html 3. Anaerobic L-a-Glycerophosphate Dehydrogenase of Escherichia coli: Its Genetic Locus and Its Physiological Role', W. S. KISTLER' AND E. C. C. LIN, Department of Microbiology and Molecular Genetics, Harvard Medical School, Boston, Massachusetts