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CALDO PARAGINA

COMPONENTE

Asparagina DL Anhidro dipotasio hidrogenofosfato Sulfato de magnesio heptahidratado

CANTIDAD DE REACTIVOS A ADICIONAR PARA MEDIO A DOBLE CONCENTRACIÓN (g)

CANTIDAD DE REACTIVOS A ADICIONAR PARA MEDIO A SIMPLE CONCENTRACIÓN (g)

6,0

3,0

2,0

1,0

1,0

0,5

CANTIDAD TOTAL DE AGUA A ADICIONAR (ml)

1000

- Pese asépticamente los gramos de Asparagina DL, o la cantidad calculada de acuerdo con la necesidad para preparar el medio de cultivo de doble o simple concentración según se requiere. Verifique que no queden residuos del reactivo en la rosca o en la parte externa del frasco que lo contiene. Ciérrelo inmediatamente. - Vierta bajo condiciones asépticas la Asparagina DL en el beaker o recipiente seleccionado. - Agregue 1000 ml de agua destilada o desmineralizada o el volumen establecido de acuerdo con la necesidad. Agite constantemente con la espátula hasta disolución completa. Nota. Cada que utilice un reactivo tápelo inmediatamente. -Continúe adicionando asépticamente, cada uno de los reactivos en las cantidades establecidas en la tabla, agitando constantemente luego de cada adición, garantizando su disolución. - Una vez adicionados cada uno de los reactivos necesarios para la preparación de este medio de cultivo, determine el valor de pH de la solución, el cual se debe encontrar entre 6,9 y 7,2 Si el pH se encuentra por debajo del rango ajústelo adicionando lentamente hidróxido de sodio 0.1 N. Si el pH se encuentra por encima del rango ajústelo adicionando lentamente ácido clorhídrico 0.1 N. Nota. Es de vital importancia para el adecuado funcionamiento del medio, que el pH se encuentre dentro del rango establecido. - Utilice la bureta semiautomática graduada a 10 ml o en su defecto la pipeta bacteriológica de 10 ml para distribuir bajo condiciones asépticas 10 ml del medio de cultivo a doble concentración en cada uno de los tubos tapa rosca para ser utilizados en la determinación de Pseudomona s.p. y Aeruginosa por el método de tubo múltiple para agua de la fuente, en proceso de tratamiento, agua potable envasada y en la determinación de Pseudomona s.p. y Aeruginosa por el método en tubo múltiple modificado para empaques, superficies, y agua del enjuague del proceso de limpieza e higienización - Distribuya asépticamente 50 ml del medio de cultivo a doble concentración en frascos tapa

rosca azul con capacidad mínima de 100 ml, para ser utilizados en la determinación de la presencia- ausencia de Pseudomona s.p. y Aeruginosa para agua de la fuente, en proceso de tratamiento, agua potable envasada y agua de enjuague del proceso de limpieza e higienización. Distribuya asépticamente 100 ml del medio de cultivo a doble concentración en frascos tapa rosca azul con capacidad mínima de 200 ml, para ser utilizados en la determinación de la presencia- ausencia de Pseudomona s.p. y Aeruginosa para agua de la fuente, en proceso de tratamiento, agua potable envasada y agua de enjuague del proceso de limpieza e higienización. - Cierre herméticamente los frascos tapa rosca girando la tapa a la izquierda un cuarto de vuelta, dejando ésta ligeramente ajustada, garantizando algunas de las condiciones necesarias para el proceso de esterilización. - Identifique cada uno de los frascos con el nombre del medio de cultivo y la fecha de su preparación. - Esterilice en la autoclave a una presión de 15 libras, a 121 ° C de temperatura durante 10 minutos. Nota. Se debe controlar estrictamente la temperatura y el tiempo de esterilización, para evitar la precipitación de las sales. - Retire los frascos de la autoclave, ajuste herméticamente la tapa. Verifique que el medio presente una transparencia cristalina. 4.4.3 Almacenamiento. Almacene los reactivos deshidratados, en un sitio exclusivo para medios de cultivo, protegido contra la luz, limpio y seco, con una temperatura entre 15°C y 25°C. Mantenga el envase siempre cerrado conservando el liner de sello y la tapa ajustados herméticamente. Utilice los reactivos hasta la fecha de vencimiento establecida por la casa fabricante. Almacene el medio de cultivo preparado, en nevera a temperaturas de refrigeración entre 4°C y 8°C, no debe permitir temperaturas por debajo de 0°C. El frasco que contiene el medio debe estar provisto de tapa con cierre hermético e impermeable. Utilice el medio de cultivo antes de 1 mes, después de su preparación.

CALDO CETAMIDA

COMPONENTE

Acetamida Cloruro de sodio Anhidro dipotasio hidrogenofosfato Anhidro potasio dihidrogenofosfato Magnesio de sulfato heptahidratado *Rojo de fenol

CANTIDAD DE REACTIVOS A ADICIONAR PARA MEDIO A SIMPLE CONCENTRACIÓN (g)

CANTIDAD DE REACTIVOS A ADICIONAR PARA MEDIO A DOBLE CONCENTRACIÓN (g)

10,0 5,0

20,0 10,

1,39

2,78

0,73

1,46

0,5

1,0

0,012

0,012

CANTIDAD TOTAL DE AGUA A ADICIONAR (ml)

1000

*Si no posee balanza que pese 0,012 g, lleve a cabo los siguientes pasos: - Pese asépticamente 0,12 g de rojo de fenol y adiciónelo en un balón aforado de 50 ml - Adicione lentamente al balón aforado conteniendo rojo de fenol, agua destilada o desmineralizada hasta completar un volumen final de 50 ml - Tape el balón y agite hasta completa disolución - Mida 5 ml de esta solución y adiciónela a la solución de caldo acetamida de doble o simple concentración que está preparando. Nota. 5 ml de esta solución equivalen a 0,012 g de rojo de fenol. Tenga presente que el volumen de la solución de rojo de fenol debe ser descontado del volumen de agua destilada o desmineralizada, necesaria para preparar el medio de cultivo. - Comience la preparación pesando asépticamente en la balanza, los gramos de acetamida correspondientes al medio de cultivo a preparar de doble o simple concentración según se requiera, con ayuda de la espátula plana. Después de pesar el reactivo, cierre inmediatamente el frasco que lo contiene, verificando que no queden residuos de reactivo en la rosca o en la parte externa de éste. Nota. Cada que utilice un reactivo tápelo inmediatamente. - Vierta bajo condiciones asépticas, la acetamida, en un beaker o recipiente seleccionado. - Mida el volumen requerido de agua destilada o desmineralizada en una probeta y agregue lentamente el volumen de agua al beaker que contiene la acetamida. - Agite constantemente con la espátula, hasta disolver completamente la acetamida -Continúe adicionando asépticamente, cada uno de los reactivos en las cantidades establecidas en la tabla para preparar el medio de cultivo a doble o simple concentración según lo requiera, agitando constantemente luego de cada adición, garantizando su disolución.

- Una vez adicionados cada uno de los reactivos necesarios para la preparación de este medio de cultivo, determine el valor de pH de la solución, el cual se debe encontrar entre 6,9 y 7,2. Nota. Es de vital importancia para el adecuado funcionamiento del medio, que el pH se encuentre dentro del rango establecido. - Si el pH se encuentra por debajo del rango, ajústelo adicionando gota a gota hidróxido de sodio 0,1 N. - Si el pH se encuentra por encima del rango, ajústelo adicionando gota a gota ácido clorhídrico 0.1 N - Utilice la bureta semiautomática o en su defecto la pipeta bacteriológica, para distribuir bajo condiciones asépticas 10 ml del medio de cultivo preparado a simple concentración en cada uno de los tubos tapa rosca para ser utilizados en la determinación del N.M.P. de Pseudomona Aeruginosa por el método de tubo múltiple para agua de la fuente, en proceso de tratamiento, agua potable envasada y en la determinación Pseudomona Aeruginosa por el método en tubo múltiple modificado para empaques, superficies, y agua del enjuague del proceso de limpieza e higienización. - Distribuya asépticamente 25 ml del medio de cultivo a doble concentración en frascos tapa rosca azul con capacidad para 50 ml, para ser utilizados en la determinación de la presencia ausencia de Pseudomona Aeruginosa para agua de la fuente, en proceso de tratamiento, agua potable envasada y agua de enjuague del proceso de limpieza e higienización. - Cierre herméticamente el tubo o los frascos tapa rosca girando la tapa a la izquierda un cuarto de vuelta, dejando ésta ligeramente ajustada, garantizando algunas de las condiciones necesarias para el proceso de esterilización. - Coloque los tubos en las canastillas de alambre e identifíquela con el nombre del medio de cultivo y la fecha de su preparación, o en su defecto identifique cada uno de los frascos. - Esterilice en la autoclave a una presión de 15 libras, a 121 ° C de temperatura durante 10 minutos. Nota. Se debe controlar estrictamente la temperatura y el tiempo de esterilización, para evitar la precipitación de las sales. - Retire los tubos o frascos de la autoclave, ajuste herméticamente la tapa. Verifique que el medio presente una transparencia cristalina. 4.3.3 Almacenamiento. Almacene los reactivos deshidratados, en un sitio exclusivo para medios de cultivo, protegido contra la luz, limpio y seco, con una temperatura entre 15°C y 25°C. Mantenga el envase siempre cerrado conservando el liner de sello y la tapa ajustados herméticamente. Utilice los reactivos hasta la fecha de vencimiento establecida por la casa fabricante. Almacene el medio de cultivo preparado, listo para el uso, en nevera a temperaturas de refrigeración entre 4°C y 8°C, no debe permitir temperaturas por debajo de 0°C. El frasco

que contiene el medio debe estar provisto de tapa con cierre hermético e impermeable. Utilice el medio de cultivo antes de 1 mes, después de su preparación.