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ASOCIACIÓN UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA PRACTICA N. 13 JESUS MEJIA TORBISCO CURSO BIOQUIMICA MÉDICA

INTRODUCCION

Las transaminasas GOT y GPT son enzimas ampliamente difundidas en el organismo con elevada concentración en corazón, hígado, músculo esquelético, riñón y eritrocitos. La actividad sérica en condiciones normales es baja o nula. Un daño o enfermedad en cualquiera de estos tejidos conduce a un aumento en los niveles séricos. Así, luego de un infarto de miocardio se produce en suero un marcado aumento de la actividad de GOT (abundante en músculo cardíaco). En hepatitis virales y otras formas de enfermedad hepática que involucren necrosis tisular, predominará la actividad sérica de GPT (abundante en tejido hepático). Una elevada actividad de transaminasas puede detectarse también en traumas accidentales o quirúrgicos y en distrofias musculares o miositis.

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MARCO TEORICO

IMPORTANCIA CLINICA: Las transaminasas son enzimas ampliamente difundidas en el organismo, que catalizan la transferencia de un grupo amino de un aminoácido a un cetoàcido, en una de las más importantes reacciones del metabolismo proteico. El interés clìnico está centrado especialmente en dos de ellas: TGO (transaminasa glutámico oxalacètica) y TGP (transaminasa glutámico pirùvica). Estas enzimas tienen acción eminentemente intracelular, por lo que la actividad sérica en condiciones normales es baja o nula. Un aumento de la actividad será evidencia de un deterioro de los tejidos en que se encuentran, de los cuales resultan particularmente importantes corazón e hígado. Se ha observado que luego de un infarto de miocardio se produce en suero un marcado aumento de la actividad de la TGO, debido a la liberación al torrente sanguíneo de esta enzima, tan abundante en músculo cardìaco. En este caso no existirà aumento en la actividad sérica de TGP ò será mínimo. En hepatitis virales y otras formas de enfermedad hepática que involucren necrosis de tejido, habrá un incremento considerable de la actividad sérica de transaminasas, incluso antes de la aparición de síntomas clínicos como ictericia. En este caso, la TGP será el enzima predominante debido; a su gran concentración en el tejido hepático. Una elevada actividad de transaminasas puede detectarse también en traumas accidentales o quirúrgicos y en distrofias musculares y miosis. FUNDAMENTOS DEL METODO: Una reacción de trasnominación consiste en la interconversión de un grupo amino (NH2CH- COOH) de un aminoácido, con un grupo cetónico (O=C-COOH) de un cetoácido. Este intercambio está catalizado por enzimas conocidas con el nombre de transaminasas. En el suero humano, por lo general, se determinan dos tipos principales: la Glutámico Oxalacética (TGO) y Glutámico Pirúvica (TGP).

REACTIVOS:

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1.- Sustrato TGO: Solución conteniendo 100 mmol/l de l-aspartato y 2 mmol-l de alfa-cetoglutarato en buffer fosfatos 100 mmol/l, pH 7,4. 2.- Sustrato TGP: Solución conteniendo 200 mmol/l de l-alanina y 2 mmol/l de alfa cetoglutarato en buffer fosfatos 100 mmol/l, pH 7,4. 3.- Reactivo 2,4-DNFH: Solución conteniendo 1 mmol/l de 2,4-dinitrofenilhidrazina en ácido clorhídrico mmol/l. Esta solución es corrosiva y debe guardarse en frasco oscuro.

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4.- Standard de Calibración: Solución de piruvato de sodio 2 mmol/l. Para efectuar la curva de calibraciòn. para usar en la curva de TGP. Diluir 1:2 con sustrato par la curva de TGO.

Listo

5.- Hidróxido de Sodio para Enzimas: Solución de hidròxido de sodio 4 mol/l Antes de usarse, se deberá diluir el contenido de este frasco a 1 litro de agua destilada para así alcanzar la concentración requerida de NaOH 0.4mol/l. Es importante notar que el hidróxido de sodio debe conservarse en frasco de plástico y no de vidrio. Conservar el frasco lejos del reactivo de color pues los vapores pueden contaminar ambos reactivos.

OBJETIVO Determinar mediante el procedimiento experimental las transaminasas (TGO y TGP) en suero y la importancia biomédica en su alteración de los valores normales

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PROCEDIMIENTO: Experimento A: DETERMINACIÓN DE TRANSAMINASAS (TGO Y TGP) EN SUERO PROCEDIMIENTO PARA DETERMINAR TGO EN SUERO: Preparar los tubos: B Rx A (TGO-TGP) 0,5 ml Colocar en baño maría por 5 minutos

D 0,5ml

B SUERO ---AGUA 100 UL Mesclar y agitar, incubar por 30 minutos

D 100UL ------

B Rx B 0,5 ml Mesclar dejar 10 minutos a 37 C y agregar

D 0,5ml

Rx C

B 5 ml

D 5ml

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Mesclar por agitación esperar 2 minutos en baño maría

Medir a 505 nm

Resultados: Tubo (B) = Tubo (D) =

Calculo:

PROCEDIMIENTO PARA DETERMINAR TGP EN SUERO: Preparar los tubos:

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B Rx A (TGO-TGP) 0,5 ml Colocar en baño maría por 5 minutos

D 0,5ml

B SUERO ---AGUA 100 UL Mesclar y agitar, incubar por 30 minutos

D 100UL ------

B Rx B 0,5 ml Mesclar dejar 10 minutos a 37 C y agregar

D 0,5ml

Rx C

B 5 ml

Mesclar por agitación esperar 2 minutos en baño maría

D 5ml

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Medir a 505 nm

Resultados: Tubo (B) = Tubo (D) =

Calculo:

VALORES DE REFERENCIA: Se consideran valores normales de transaminasas (TGO y TGP) hasta 12 U/l. Si bien se han hallado individuos normales con valores hasta 18 U/l, los niveles de transaminasas que se encuentren entre 12 y 18 U/l deben considerarse sospechosos.

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CONCLUSIONES La medición de la actividad sérica de las transaminasas es una de las pruebas de laboratorio más empleadas en la práctica diaria ya que nos ayuda a determinar mediante la clínica las posibles patologías que se puedan generar en el individuo

CUESTIONARIO 1.- Explique en qué consiste el fenómeno de transaminaciòn y donde se realiza en el organismo?

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La primera es la reacción entre un aminoácido y un alfa-cetoácido, en la que el grupo amino es transferido de aquel a éste, con la consiguiente conversión del aminoácido en su correspondiente alfa-cetoácido. Después de la formación de glutamato, éste transfiere su grupo amino directamente a una variedad de alfa-cetoácidos por varias reacciones reversibles de transaminación: donación libremente reversible de un grupo amino alfa de un aminoácido al grupo ceto alfa de un alfa-cetoácido, acompañado de la formación de un nuevo aminoácido y un nuevo alfa-cetoácido. Estas reacciones son llevadas a cabo por enzimas llamadas aminotransferasas. Todas estas enzimas requieren de fosfato de piridoxal (vitamina B6) como grupo prostético, una razón importante de que esta vitamina sea esencial para la vida. Un ejemplo importante de transaminación se presenta entre glutamato y oxaloacetato, que produce alfa-cetoglutarato y aspartato, el que puede transferir su grupo amino a otros alfa-cetoácidos para formar aminoácidos diferentes por reacciones de transaminaciòn

Se realiza en mayor proporción en el hígado también en el músculo cardiaco y el musculo estriado 2.- Qué relación existe entre las transaminasas y las enfermedades hepáticas? La elevación de transaminasas es un proceso muy inespecífico que puede ocurrir en casi todas las enfermedades hepáticas y en numerosas extra hepáticas. Sistematizar la actitud ante su elevación es muy complicado La elevación marcada de las transaminasas denota la existencia de inflamación y necrosis hepática aguda, habitualmente de duración inferior a 3-6 meses. Cuando la ALT (GPT) es superior a 1.000 UI/l, casi con toda seguridad nos encontramos ante una de las tres situaciones siguientes: • Hepatitis aguda viral (virus A, B y C, fundamentalmente).

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• Hepatitis por fármacos o tóxicos. • Hepatitis isquémica (fallo cardiocirculatorio agudo). Estos pacientes suelen presentar síntomas, aunque no siempre es así

3.- Como se encuentran las transaminasas en el infarto agudo de miocardio? Luego de un infarto de miocardios se produce en suero un marcado aumento de la actividad GOT (abundante en musculo cardiaco) debido a la liberación al torrente sanguíneo de esta enzima, tan abundante en músculo cardíaco. 4.- Señale cuáles son los métodos de análisis conocidos para dosaje de transaminasas? En el suero humano, por lo general, se determinan dos tipos principales: la Glutámico Oxalacética (TGO) y Glutámico Pirúvica (TGP). Ellas catalizan las siguientes reacciones:

El oxalacetato y el piruvato así formados, reaccionan con el reactivo 2,4dinitrofenilhidrazina (2,4 – DNFH), generando fenilhidrazonas, las cuales en medio alcalino (NaOH) producen un complejo coloreado cuya intensidad es proporcional a la actividad enzimática de transaminasas en la muestra. 5.- Existe variación de transaminasas con la edad?

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En una rama de este estudio se objetivó que, al hacer el análisis por grupos de edad; a más edad, menor límite de normalidad. El punto de corte también es más alto en hombres que en mujeres y, aunque no se conoce la razón, podría estar relacionado con las diferencias en la masa muscular y las hormonas sexuales (Poutschi H, 2011). El límite superior de la normalidad también se incrementa con la edad y el peso corporal, además los niveles de la ALT sufren variaciones a lo largo del día y son más altos por la tarde que por la noche (Giboney PT, 2005; Krier M, 2009).

BIBLIOGRAFIA

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1. Murray, Mayes, Granner, Rodwell. Bioquímica de Harper, Editorial Manual Moderno, 15ava. Edición, 2001.Páginas consultadas: 243 a 254, 700 a 715. 2. Laguna José, Piña Enrique. Bioquímica, JGH Editores, 4ta. Edición, 1990. Páginas Consultadas: 218 a 223. 3. Regulation of Triglyceride Metabolism. IV. Hormonal regulation of lipolysis in adipose tissue. Kathy Jaworski, Eszter Sarkadi-Nagy, Robin E. Duncan, Maryam Ahmadian, and Hei Sook Sul.