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INFORME DE LABORATORIO Carrera de Biotecnología Práctica 2

Nombres: Daniela Acurio y Mikaela Pérez NRC: 4070 Docente: Alma Koch 1. TÍTULO DE LA PRÁCTICA: Frotis y Tinción Simple y Diferencial de Levaduras. 2. PALABRAS CLAVE: Frotis, tinción simple, tinción diferencial 3. RESUMEN: Se aprendió las técnicas básicas de preparación y coloración, mediante la realización de tres frotis de Saccharomyces cerevisiae (levadura). En cada uno de puso en práctica el método correcto para sus diferentes tipos de tinción (simple y diferencial) y se distinguió las diferencias entre las mismas analizándolas con el microscopio a 100x. 4. INTRODUCCIÓN: a. Antecedentes: La tinción microbiológica es una de las herramientas más importantes en el laboratorio. Ayudando desde hace un siglo a resolver problemas de tipo microbiano. Existe diferentes tipos de tinciones que se han ido desarrollando para la localización de diferentes agentes infecciosos. La tinción Gram es de las más conocidas para el análisis bacteriológico (López Jácome, y otros, 2014). b. Justificación del problema de estudio: La forma y tamaño de los microorganismos hacen que sea difícil el visualizarlos en el microscopio, principalmente porque no es perceptible su estructura sin algún método de coloración que contraste. c. Marco Teórico: Tinción simple: Es el teñido de microorganismos aplicando un solo colorante, el cual es de tipo básico, este solo aumenta el contraste de las células las cuales absorben el color y quedan todas de igual coloración. No es diferencial ya que cuando este se aplica tiñe a todos por igual, independientemente del tipo de bacteria (Infowine, 2017). Tinción diferencial: Son aquellas tinciones que se usan al querer diferenciar explícitamente los microorganismos. En este tipo de tinción se usa más de una sustancia colorante, debido a que de esta manera se obtiene información acerca

de la composición, de las capas de la pared celular y de las células bacterianas. Entre las más conocidas están la tinción de Gram, tinción de Ziehl-Neelsen, entre otros (Santambrosio, 2009). 5. OBJETIVOS: a. General: Aprender técnicas básicas y fundamentales en la preparación de placas en el laboratorio microbiológico. b. Específicos: Teñir el núcleo y observar la morfología microscópica general de levaduras. 6. HIPÓTESIS: Se observan las levaduras, su núcleo y su vacuola en la tinción simple y la diferencial. 7. MATERIALES Y MÉTODOS: a. Ejercicio 1: Se lavó el portaobjetos y se lo rotuló. Se esterilizó el asa bacteriológica usando el mechero, hasta que este se encontraba al rojo vivo. Todo el procedimiento siguiente se lleva a cabo alrededor del mechero para evitar contaminación por microorganismos en el ambiente. Se tomó una muestra de levadura previamente preparada y se realizó un frotis, se lo deja secar completamente, se fija el frotis pasándolo varias veces por el mechero. Se lo bañó por 40 segundos con etanol, se enjuagó con agua y se puso KOH, dejándolo 30 minutos para reaccionar, sin dejar que se seque. Se enjuaga con agua por segunda vez y se colocó azul de metileno durante dos minutos. Finalmente se colocó etanol 10% y se lo secó con cuidadosos toques con el papel toalla. Después de que la muestra esté completamente seca se la observó en el microscopio a 100X con aceite de inmersión. b. Ejercicio 2: Se realizó otro frotis de levadura de la misma manera que se explicó anteriormente. Se realizó una tinción simple, poniendo solamente azul de metileno y dejándolo reaccionar dos minutos, luego enjuagando el portaobjetos con agua y secando ligeramente con el papel toalla. Se observó con aceite de inmersión a 100X en el microscopio. c. Ejercicio 3: Se realizó otro frotis de levadura de la misma manera que se explicó anteriormente. En este se colocó etanol 40% por un minuto y se enjuagó con agua. Se colocó azul de metileno por dos minutos y se volvió a enjuagar con agua y finalmente se cubrió la muestra con etanol 10%. Se secó ligeramente con papel toalla. Se observó con aceite de inmersión en el microscopio a 100X. 8. RESULTADOS: Las tres tinciones, una simple y dos diferenciales, permitieron observar las levaduras, cumpliendo el objetivo general y los específicos. En todas pudimos observar 3 cosas las levaduras de color azul, dentro de este podemos ver el núcleo de un azul marino mucho más intenso y la vacuola que es transparente. Las tinciones y lo observado en cada tinción se detalla en las Figuras 1, Figura 2 y Figura 3 a continuación.

Figura 1: Observación de tinción diferencial con KOH de levadura en 100X con aceite de inmersión.

Figura 2: Observación de tinción diferencial sin KOH de levadura en 100X con aceite de inmersión.

Figura 3: Observación de tinción simple de levadura en 100X con aceite de inmersión. 9. DISCUSIÓN: En el año 2016 Xavier Chavarría, de la Universidad San Francisco de Quito, realizó tinciones simples, diferenciales y estructurales de varios microorganismos incluyendo levaduras. Lo observado por él es lo mismo que observamos durante la práctica incluyendo división celular, el núcleo y la vacuola de la levadura. (Chavarría, Sinchiguano, & Williams, 2016). En el año 2016, se publicó un artículo en que se comparaban do tipos de colorantes para realizar la tinción en levaduras. Uno era el azul de metileno y otro la Eritrosina. Estos dos colorantes permiten ver el núcleo, la vacuola y las levaduras dentro de la muestra, siendo estas estructuras las mismas observadas por nosotros en la práctica. Respaldando nuestros resultados. (Martinez, Cárdenas, Ruiz, & Gusils, 2016). 10. CONCLUSIONES: a. Se cumplió el objetivo general, debido a que las placas preparadas en el laboratorio pudieron ser observadas sin ningún problema. b. Se cumplió el objetivo específico debido a que pudimos observar la morfología de la levadura en todas las muestras y tinciones realizadas. 11. BIBLIOGRAFÍA:

Chavarría, X., Sinchiguano, D., & Williams, C. (4 de 04 de 2016). SlideShare. Obtenido de Tincion Bacteriana: https://es.slideshare.net/XavierChavarriaBayot/tincin-bacterianatincin-simple-tincin-diferencial-tincin-gram-tincin-ziehlneelsen-acidfast-tincinestructural Infowine. (25 de Julio de 2017). Vinidea.net. Obtenido de Tincion con azul de metileno: https://www.infowine.com/intranet/libretti/libretto14427-01-1.pdf López Jácome, L. E., Hernández Durán, M., Colín Castro, C., Ortega Peña, S., Cerón González, G., & Franco Cendejas, R. (marzo de 2014). Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología. Obtenido de Media graphic: http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf Martinez, J. L., Cárdenas, G., Ruiz, M., & Gusils, C. (Junio de 2016). SciElo. Obtenido de Análisis Comparativo de colorantes vitales en el estudio de la viabilidad de levaduras: http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S185130182016000100005 Santambrosio, E. (2009). Tincion y observacion de microorganismos. Obtenido de https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/practic o4.pdf