• Author / Uploaded
• anilu

• Categories
• Organismos
• Toxicidad
• Medicamentos con receta
• Química
• Bienestar

Citation preview

go

BIOENSAYO DE TOXICIDAD EN ARTEMIA SALINA L.

González Carpio Aura Denisse, Hernández López Eduardo Martín, Nava Nava Anilú, Perez Coria Jeniffer Pollette. Laboratorio de Evaluación de Fármacos y Medicamentos 1, L-202, Facultad de Estudios Superiores Zaragoza, UNAM. Av. Guelatao, Col. Ejército de Oriente, 09320, México

MARCO TEORICO: Un bioensayo puede ser definido como cualquier prueba que involucra cualquier organismo vivo; a su vez, se puede señalar como cualquier método por medio del cual alguna propiedad de una sustancia o material, es medida en términos de la respuesta biológica que produce. La relación entre la respuesta biológica y la dosis o la concentración de una sustancia activa se relaciona en la llamada curva dosisrespuesta. Esta vinculación puede darse de forma graduada o la respuesta puede ser de tipo todo o nada, también conocida como cuantal. INTRODUCCIÓN: Los ensayos de toxicidad son los bioensayos empleados para reconocer y evaluar los efectos de los contaminantes sobre la biota. En los bioensayos se usa un tejido vivo, organismo, o grupo de organismos, como reactivo para evaluar los efectos de cualquier sustancia fisiológicamente activa. En este sentido los bioensayos de toxicidad permiten evaluar el grado de afectación que una sustancia química tiene en organismos vivos y éstos pueden ser agudos o crónicos. Las pruebas agudas cuantifican las concentraciones letales de un xenobiótico a una especie en particular. El valor calculado se denomina concentración letal media (CL50) y corresponde a la concentración de un xenobiótico que causa la muerte al 50 % de la población experimental al cabo de un tiempo determinado, generalmente en 48 o 96 horas. En contraste, las pruebas crónicas estiman la concentración – efecto media (CE50) de la sustancia de prueba que causa un efecto al 50 % de la población experimental, al cabo de un tiempo determinado. OBJETIVO: 

Determinar la CE50 y la potencia relativa del cloruro de mercurio (ll) y del sulfato de plata por medio del bioensayo en Artemia Salina L. para determinar el grado de toxicidad de los mismos en el sistema de prueba.

HIPOTESISIS: Si agregamos diferentes sustancias químicas a diferentes concentraciones al medio de crecimiento de organismo vivo, podemos determinar la DE50 debido a la sensibilidad de los organismos a los cambios químicos de su hábitat. METODOLOGIA:  

Material biologico: huevecillos liofilizados de Artemia Salina L. Cristaleria y equipo: pecera de vidrio capacidad de 2L , tubos de ensaye, pipetas de vidrio, jeringas de 1ml, matraz Erlenmeyer de 1L,vasos de precipitado de 100, 500ml, 5 pipetas con bulbo, balanza, gradillas.



Reactivos: disolución de cloruro de mercurio (ll) al 1%, disolución de sulfato de plata al 1% , agua de mar artificial, anticloro (tiosulfato de sodio al 1%).

Muestra

Volumen de disolución

Agua

V ( concentración) / V. Total

Ln

1

0

2

0(0.01) /1.9 = 0

0

2

0.2

1.8

0.2(0.01) /2 = 0.001

-3

3

0.4

1.6

0.4(0.01) /2 = 0.002

-2.69

4 0.6 Concentración 5 0.8 mg/mL 6 1

1.4 Concentración 1.2 Real mg/mL1

RESULTADOS: Tabla 1. Resultados prácticos para el Fármaco; Dicromato de Potasio

0.6(0.01) /1.8 = 0.0033 -2.48 Número de Número de Probabilidad 0.8(0.01) /2.2 = 0.0036 -2.44 Artemias Artemias P=r/n Utilizadas (n) Muertas (r) 1(0.01) /2.4 = 0.0041 -2.38

7

1

1.2

1.9 0.8

10 1.2(0.01) /2= 0.006

0

-2.22

0/10 = 0

8

2

1.4

2.0 0.6

10 1.4(0.01) /2 = 0.007 9

-2.15

9/10 = 0.9

9

3

1.6

2.0 0.4

10 1.6(0.01) /2 = 0.008 10

-2.09

10/10 = 1

10

4

1.7

1.8 0.2

10 1.7(0.01) /2 = 0.0085 10

-2.07

9/10 = 0.9

11

5

2

1.9 0

-2

10/10 = 1

10 2(0.01) /2 = 0.01

9

6

2.2

10

10

10/10 = 1

7

2.4

10

10

10/10 = 1

8

2.0

10

10

10/10 = 1

9

2.0

10

10

10/10 = 1

10

2.0

10

10

10/10 = 1

11

2.0

0

0

0/0 = 0

Tabla 2. Concentraciones para el Dicromato de Potasio

Muestra

Probabilidad

Log C

Unidades Probit

1

0/10 = 0

0

0

2

9/10 = 0.9

-3

6.28

3

10/10 = 1

-2.69

6.48

4

9/10 = 0.9

-2.48

6.28

5

10/10 = 1

-2.44

6.48

6

10/10 = 1

-2.38

6.48

7

10/10 = 1

-2.22

6.48

8

10/10 = 1

-2.15

6.48

9

10/10 = 1

-2.09

6.48

10

10/10 = 1

-2.07

6.48

11

0/0 = 0

-2

0

Tabla 3. Relación de Probabilidad con su valor Probit, y este con su Log de la concentración correspondiente

Unidades Probit Vs LogC

Valores Probit -3

-2.69

-2.48

-2.44

-2.38

Log C

r= 0.9239

-2.22

-2.15

-2.09

-2.07

Y= mx + b Yi= ßx + α ß= ­2.3247 α= 0.7891 Concentración letal 50 µ= 5­α/ β µ= 5­(0.7891)/(­2.3247) = ­1.8113 CL50= 10^µ = 0.01544mg/mL  Tabla 4. Resultados prácticos para el Fármaco Nicotina al 2% Concentración mg/mL

Concentración Real mg/mL

Número de Artemias Utilizadas (n)

Número de Artemias Muertas (r)

Probabilidad P=r/n

1

1.8

10

0

0/10 = 0

2

1.9

10

2

2/10 = 0.2

3

2.1

10

4

4/10 = 0.4

4

2.2

10

3

3/10 = 0.3

5

2.2

10

6

6/10 = 0.6

6

2.0

10

9

9/10 = 0.9

7

2.0

10

9

9/10 = 0.9

8

2.1

10

9

9/10 = 0.9

9

2.0

10

10

10/10 = 1

10

2.1

10

10

10/10 = 1

11

1.9

0

0

0/0= 0

Tabla 5. Concentraciones para la Nicotina al 2% Muestra

Volumen de disolución

Agua

V ( concentración) / V. Total

Ln

1

0

2

0(0.02) /1.8 = 0

0

2

0.2

1.8

0.2(0.02) /1.9 = 0.0021

-2.67

3

0.4

1.6

0.4(0.02) /2.1 = 0.0038

-2.42

Muestra

Volumen de disolución

Agua

V ( concentración) / V. Total

Ln

4

0.6

1.4

0.6(0.02) /2.2 = 0.0054

-2.26

5

0.8

1.2

0.8(0.02) /2.2= 0.0072

-2.14

6

1

1

1(0.02) /2.0 = 0.01

-2

7

1.2

0.8

1.2(0.02) /2.0= 0.012

-1.92

8

1.4

0.6

1.4(0.02) /2.1 = 0.013

-1.88

9

1.6

0.4

1.6(0.02) /2.0= 0.016

-1.79

10

1.7

0.2

1.7(0.02) /2.0 = 0.017

-1.76

11

2

0

2(0.02) /1.9 = 0.021

-1.67

Muestra

Probabilidad

Log C

Unidades Probit

1

0/10 = 0

0

0

2

2/10 = 0.2

-2.67

4.16

3

4/10 = 0.4

-2.42

4.75

4

3/10 = 0.3

-2.26

4.48

5

6/10 = 0.6

-2.14

5.25

6

9/10 = 0.9

-2

6.28

7

9/10 = 0.9

-1.92

6.28

8

9/10 = 0.9

-1.88

6.28

9

10/10 = 1

-1.79

6.48

10

10/10 = 1

-1.76

6.48

11

0/0= 0

-1.67

0

Unidades Probit Vs Log C Nicotina 2% 7 5

Unidades Probit

4 2 0 -2.67

-2.42

-2.26

-2.14

-2

-1.92

-1.88

-1.79

-1.76

Log C 6. Relación de Probabilidad con su valor Probit, y este con su Log de la concentración correspondiente para la Nicotina al 2%

Y= mx + b Yi= ßx + α ß= 1.6927 α= ­1.778

Concentración letal 50 µ= 5­α/ β

Tabla

µ= 5­(1.778)/(1.6927) = 1.9034 CL50= 10^µ = 79.43mg/mL  DISCUSIÓN DE RESULTADOS: Se utilizan sistemas alternos para cuantificar la toxicidad de los compuestos, ya que no se pueden realizar en seres humanos, en esta práctica se realizó mediante un sistema utilizando Artemias Salinas como sujetos de estudio, y se comparó la acción tóxica de dos fármacos, La Nicotina al 2% y el Dicromato de Potasio al 1% determinando el CL50 de dichos compuestos. La forma de interpretar los resultados se basó en la relación que se tiene entre la concentración de los compuestos en el medio, con el número de muertes de nuestros sujetos de estudio, como se muestra en las tablas 1 y 4. Donde podemos observar Se observa una tendencia común entre los dos compuestos (Dicromato de Potasio y Nicotina) el número de muertes aumenta al aumentar la concentración de estos en el medio esto es lógico y esperado ya que al aumentar la concentración de en el medio un mayor número de iones atravesarán la membrana generando un mayor daño celular, es de esperarse también que algunas artemias hayan muerto con una concentración mucho menor a otras, esto debido a su variabilidad biológica cada artemia tiene su propia sensibilidad a la fuerza oxidativa del dicromato y de la nicotina. Sin embargo el promedio, que es el valor representativo de nuestra población sigue la tendencia antes mencionada, a mayor concentración más muertes. Podemos observar al Dicromato con una Concentración Letal 50 = 0.01544mg/mL y la Nicotina (Concentración Letal 50 = 79.43mg/mL). Esto probablemente se debe a la integridad de la molécula de nicotina y a que el dicromato es una sal disociable con facilidad de penetrar las membranas del nauplio, siendo altamente oxidante. CONCLUSIONES: De acuerdo a los resultados obtenidos tras la práctica, se concluye que la Concentración letal media de Nicotina al 2% a concentraciones variadas es 0.01544mg/mL y 79.43mg/mL para Dicromato de potasio en un número de 10 nauplios, concluyéndose que el dicromato es más tóxico que la nicotina, pues este requiere una menor concentración para producir el mismo efecto al 50% de la población de nauplios. También podemos decir que la toxicidad es un parámetro directamente proporcional a la concentración. Pudimos de igual manera concluir que se pueden utilizar otros organismos diferentes a los mamíferos y roedores comunes en las prácticas de laboratorio con el fin de conocer la toxicidad de xenobióticos. Además es una herramienta muy útil para calcular concentraciones letales usar animales en sistemas in vitro y sin necesidad de sacrificar organismos de mayor complejidad. Concluimos finalmente que el Cromo (VI) es un agente oxidante muy fuerte y muy tóxico quien a concentraciones muy bajas puede causar efectos tóxicos y letales en diferentes organismos, por lo que su uso debe ser controlado para evitar desequilibrios biológicos y ambientales.

La finalidad principal de realizar ensayos de toxicidad es evitar la selección de fármacos que contengan compuestos citotóxicos y así mismo su venta para consumo. Como complemento podemos decir que las unidades Probit utilizadas son una medida de cuantificación probabilística aplicable para las condiciones desfavorables en un número de individuos. SUGERENCIAS:  

La primera sugerencia es que se incube en un volumen menor de agua. La segunda sugerencia es utilizar pipetas con bulbo integrado, es menos difícil atrapar nauplios.

REFERENCIAS:    





Lain L. O., Las bases farmacológicas de la terapeútica, 11va Ed, McGrawHill: 2006. Delgado A., Introducción a la química terapeútica, 2da Ed, Díaz de Santos editorial. Katzung G., Farmacología humana, 6ta Ed, ELSEVIER, México: 2003. Artemia Salina, disponible en: http://www.andresroca.com/fotosdiscos/informacion/artemia_salina.htm [último acceso: 12-oct-2015] Importancia Del Bioensayo De Artemia Salina, disponible en: http://www.comprendamos.org/alephzero/52/importancia_del_bioensayo_de_art emia_salina.html [último acceso: 12-oct-2015] ¿Qué es un LD50 y LC50?, Disponible en: http://www.ccsso.ca/oshanswers/chemicals/ld50.html [último acceso: 12-oct2015]